Содержание

Отзывы о SMMOK – быстрый заработок

CME Group – это якобы международный брокер. На самом деле перед нами очередной обман. Очередные мошенники которые еще раз посвятили свой лохотрон CME Group. Данный лохотрон создавался только с одной единственной целью, развести как можно больше доверчивых пользователей на деньги. Конечно заметить, что перед нами лохотрон можно, вед начнем с того, что сайт официальной компании находиться вообще по другому адресу. Итак, чтобы не быт голословными, давай изучим внимательно проект, чтобы вывеси жуликов на чистую воду.

Сайт это именно то с чего начинается сам развод. Данный сайт, это настоящий сайт, CME Group, но если внимательно приглядеться, то мы увидим с вами еще две странички, которые добавили сюда аферисты. И именно это отличие помогает как раз таки понять, что перед нами не оригинал, а его жалкая подделка. Одна страничка выступает в роли главной, а вторая служит, как авторизационная.

И сделала она здесь как раз для того, чтобы пользователи попали именно в лапы к аферистам, а не настоящий сайт. Причем на настоящий сайт ведут все вкладки. Разумеется сам сайт очень качественный и претензий к нему нет. Поскольку тут есть абсолютно все. И юридическая информация и контактная. Именно на это делают основной упор жулики.

Ведь в своих мошеннических действиях они используют настоящий сайт компании CME Group. Контактная информация здесь так же сворованная и поэтому с ней полный порядок. Единственное, что от себя добавили аферисты так это форму обратной связи и сделана она здесь все не для общения с вами, а для того, чтобы просто собирать личные данные пользователей и потом использовать в корыстных целях. Например заваливать вашу почту большим количеством спама.

Итак, CME Group является ведущим мировым рынком деривативов. Компания состоит из четырех обозначенных контрактных рынков (DCM). Это организация с глобальными рынками, дающая участникам возможность эффективно управлять рисками и использовать возможности в каждом крупном классе активов. Торговля фьючерсами, опционами, наличными и внебиржевыми рынками, оптимизация портфелей и анализ данных в CME Group, ведущем и наиболее разнообразном рынке деривативов в мире. Что же здесь от нас требуется, для начала чтобы мы стали клиентами CME Group.

Но только проблема в том, что здесь мы с вами станет не клиентами не настоящей компании. А кучки ушлых аферистов. Причем аферисты просто украли чужой сайт, дополнили его несколькими страничками и теперь просто разводят наивных пользователей на приличные деньги.

Поэтому связываться с этим проектом настоятельно не рекомендуется. Хотите работать непосредственно с CME Group – заходите на их сайт и регистрируйтесь. Несмотря, что мошеннический проект только недавно всплыл в сети, это вовсе не помешало ему собрать вокруг себя уже кучу негативных отзывов. А так же у конкретного сайта минусовый рейтинг доверия.

Вывод про брокеров

CME Group — это нормальная компания, которая работает честно и легально. А сайт cmerussia.com это мошенники, которые просто используют репутацию честной компании и активно паразитируют на их сайте. И все это делается ради получения халявных денег. Будьте предельно осторожны и по возможности проходите мимо подобных проектов, иначе вы рискуете стать жертвами аферистов и потерять свои деньги.

Отзывы про CME Group

В своем отзыве я хочу рассказать подробности о сайте — мошеннике, который предлагает зарабатывать деньги всем желающим. Этот сайт называется CME Group и он своим предложением заработать убеждает очень нмого пользователей вложить деньги и получить прибыль от вложения.

Этот сайт создан очень хорошо, он отлично оформлен и продуманы все тонкости досконально. На самом деле есть такая компания, которой называет себя этот сайт, но только есть настоящая компания, а есть та, о которой я вам сейчас говорю и отличить их совсем легко. Изначально, чтобы вам не попасться нужно просто понимать, что ни один настоящий сайт для прибыли не предложит вам огромных денег просто так. Этот же сайт предлагает сказочный доход, которого вы не сможете получить. У сайта две страницы, одна из них с информацией о заработке на сайте. Там же вы увидите отзывы людей, которые якобы заработали на сайте. А вторая ссылка вас переведет именно на сайт — мошенник, а не на сайт компании.

Мне показалось странным то, что главная страница сайта на русском языке, а все остальные на английском. Мне показалось .что все остальное, кроме главной страницы было взято именно с настоящего сайта компании. Есть вся юридическая информация, которая подтверждает существование компании и показывает нам то, где находится компания, телефоны компании и самую важную информацию. Она на сайте есть, но контактная и адресная информация на сайте указывает точное местоположении настоящей компании и не компании мошенника. Именно поэтому очень легко попасться на уловку мошенника.

Вся информация контактная, которая имеется на сайте относит себя ни к компании мошеннику, а к настоящей компании, поэтому выглядит все честно и попасть на это может каждый. А вот обратная связь совершенно бесполезна на этом сайте, она ведет к мошенникам, но ответа по обратной связи вы не получите. Кстати, ссылка у сайта отличается от ссылки официального сайта компании и, если обратить на это внимание, то можно найти этот подвох и во время обойти стороной этот сайт.

Компания — мошенник создана именно для того, чтобы получать деньги с доверчивых людей, но я надеюсь, что мой отзыв будет полезным и он отведет вас от этой беды и вы не вложить деньги в сайт мошенник.

Вопрос и данные о брокерской платформе

CME GROUP INC. Юридический адрес 20 South Wacker Drive, Chicago, Illinois, 60606, USA TIN (Taxpayer Identification Number)

  1. 36-4459170
  2. The NASDAQ Stock Market LLC
  3. ISIN код US12572Q1058
  4. CFI код ESVUFR
  5. CME Group / Chicago HQ Phone
  6. Phone: +7 499 961 05 49
  7. Toll Free (US Only): +1 866 716 7274

Обещают вывести потерянные средства у брокера после оплаты страховки на блок чейн кошелек.

Можно ли верить, или это очередное мошенничество?

                 Важно! По всем вопросам, если не знаете, что делать и куда обращаться:

                                              Звоните 8-800-777-32-16.

                                       Бесплатная горячая юридическая линия.  

SMMok(СММок) – отзывы пользователей, обзор, аналоги.

SMMok — биржа социального продвижения, одинаково интересная как для фрилансеров в плане заработка, так и для заказчиков, желающих прорекламировать себя или товар в социальных сетях.

Возможности:

  • Подписчики на страницу, друзья, лайки / репосты (автозадачи для владельцев сообществ), просмотры страниц. Набор целевой аудитории с приглашений.
  • Также можно полностью имитировать живую активность ваших страниц и все это автоматизировано.
  • Фильтры по исполнителям: пол/возраст/страна/города (можно выбирать несколько одновременно) количество друзей на аккаунте исполнителя — полезнейший фильтр для поднятия охвата.

Популярные сервисы для SMM (Продвижения в социальных сетях)

Популярный сервис

Популярный сервис

Популярный сервис

Популярный сервис

Популярный сервис

Smmok отзывы Сммок отзывы

Smmok.

ru отзывы пользователей и подробности о сервисе

Подробный и детальный отчет о сервисе Smmok.ru
В отчёте указаны подробные и детальные характеристики сервиса бесплатной накрутки Smmok.ru

Домен: smmok.ru
Сервер DNS: ns1.ihc.ru
Сервер DNS: ns2.ihc.ru
Состояние: зарегистрирован, делегирован
Администратор домена: Частное лицо «Private person»
Регистратор: REGRU-RU
Дата регистрации: 2012.10.10
Дата окончания регистрации: 2016.10.10

Сайт.

Регистрация на сайте происходит по средствам аккаунта ВКонтакте.

Информация с сайта smmok

О проекте
SMMOK.ru – удобный и эффективный инструмент для проведения рекламных кампаний в социальной сети Вконтакте. Цель проекта состоит в том, чтобы создать максимально взаимовыгодные условия
для заказчика и исполнителя, тем самым дать возможность исполнителям зарабатывать а заказчикам иметь качественную рекламу по лояльным ценам.

Количество пользователей SMMOK.ru регулярно добавляется за счет переходов с разнопрофильных вэб-страниц интернета, это дает заказчику довольно расширенную аудиторию по интересам.

В сервисе сайта предусмотрена партнерская программа, информация о которой передается от одних пользователей социальной сети к другим, она воспринимается как дружеский совет или рекомендация,
основанная на личном опыте.

С помощью SMMOK.ru заказчики при минимальных затратах имеют возможность регулировать свою рекламную компанию, выбрать нужную им аудиторию по фильтрам. При этом они могут расчитывать на
реальных людей (исполнителей) благодоря современной анти-бот защите, а также отслеживать выполнение заказа в реальном времени.

С помощью SMMOK.ru обеспечивается идеальное взаимодействие между заказчиками рекламы и ее непосредственными исполнителями – участниками соц. сети Вконтакте.

Главная страница.

Фото интерфейса Smmok.ru

Вам будет предложено две основных кнопки.
1. Зарабатывать на заданиях
2. Создать рекламную компанию

Выполнение «заданий» выглядит так.

Заказ на выполнение заданий.

Как заработать в сервисе Smmok с аккаунтом вконтакте

Начинаем разбираться с еще одним популярным сервисом для заработка. Называется он SMMok, и по отзывам пользователей, позволяет заработать неплохие деньги, используя свою страничку вконтакте.

Несколько слов про этот сервис, уже было сказано, в материале — как заработать на кликах вконтакте. Сейчас будет более подробное руководство.

Я покажу вам, как правильно регистрироваться в системе. Мы научимся добавлять в систему свою аккаунт, и на реальном примере, попробуем выполнить доступное задание. В завершении разберем вывод денег.

Итак, как заработать в сервисе SMMok.

Оглавление:

  1. Регистрация
  2. Как заработать в сервисе Smmok
  3. Как вывести деньги со счета SMMok
  4. Заключение

Регистрация

Для начала нужно осуществить вход. Вот ссылка на сам сервис:

https://smmok2.ru/?a=1023302

Вот так выглядит главная страница.

Чуть ниже есть кнопка «Вход в систему через Вконтакте». Нажмите ее, чтобы начать процесс авторизации.

Если вы залогинены вконтакте, то система автоматически определить это, и подключит ваш аккаунт (см. как восстановить пароль вконтакте).

Вы автоматически будете перемещены в личный кабинет.

Как заработать в сервисе Smmok

Весь процесс сводится к тому, что вы будете выполнять задания рекламодателей. В случае успешного выполнения, на ваш счет будут зачисляться деньги. Которые можно вывести.

Чтобы приступить к работе, в личном кабинете нажмите кнопку «Зарабатывать на заданиях».

Вы будете перемещены к списку доступных заданий. Вам сразу предлагают ознакомиться с правилами системы. Из них следует, что нельзя выходить из групп, в которые вы добавились, выполняя задания в Smmok. Тоже самое касается и заявок в друзья.

После того, как вы согласитесь с правилами, можно выбирать доступные задания из списка. Все они делятся на 4 категории:

  1. Подписка
  2. Мне нравится
  3. Добавить в друзья
  4. Лайк + рассказать друзьям

Они фильтруются по вкладкам, в разделе «Начать работу».

Выберите подходящую категорию, и откройте нужную вкладку.

После этого, вам нужно выбрать подходящее задание из списка. Для начала его выполнения, нажмите на кнопку «Посмотреть задание». Появится всплывающее окно, с предложением перейти на страницу задания. Нажмите кнопку «Перейти на целевую страницу».

В зависимости от того, какой тип задания вы выбрали, будет осуществлен переход к группе, записи или фотографии. В нашем случае нужно поставить лайк под записью (см. как накрутить лайки в вк без программ бесплатно на аву).

Делаем это.

Далее возвращаемся на страницу сервиса SMMok. Всплывающее окно изменилось — теперь нам предлагают проверить выполнение задания. Или отказаться от него. Если вы все выполнили верно, нажмите кнопку «Я выполнил задание».

Если все было выполнено верно, вы получите уведомление об успешном завершении, и зачислении денег на ваш счет.

Таким образом, вы можете выполнять любое доступное задание, и зарабатывать деньги, увеличивая свой баланс.

Как вывести деньги со счета SMMok

Когда вы выполнили некоторое количество заданий, на вашем счете скопилась сумма денег. Вы можете увидеть свой баланс, там же, на странице доступных заданий.

Для того чтобы вывести их из системы, перейдите на вкладку «Вывод средств».

Здесь укажите сумму, тип перевода, и номер кошелька. Затем нажмите кнопку «Отправить заявку».

Остается только дождаться выплаты. По правилам систему, она осуществляется в течении 7 рабочих дней.

Заключение

Читайте также:

Как вы могли увидеть, использование сервиса SMMok — это еще один вариант заработка вконтакте. Огромных денег здесь ждать не приходится, но некоторую сумму можно получить без проблем.

В любом случае, я жду ваших вопросов и комментариев, по поводу использования этого сервиса. Не поленитесь, дополните эту информацию, и дайте отзыв о SMMok.

Вопросы?

Вам помогла эта информация? Удалось решить возникший вопрос?

Понравилась статья? Пожалуйста, подпишитесь на нас Вконтакте!

Facebook

Twitter

Мой мир

Одноклассники

Google+

Загрузка. ..

Videoseed.ru — отзывы, обсуждение и новости сервиса [Архив]

Просмотр полной версии : Videoseed.ru — отзывы, обсуждение и новости сервиса

Добрый Админ

25.09.2014, 00:37

В этой теме обсудим работу сервиса по заработку на просмотрах видео Videoseed.

На данный момент это третий игрок на рынке видео рекламы. Возможно видео там откручивается больше, чем в какой-либо из других систем, но в плане заработка для администраторов сообществ здесь все очень печально.

Регистрация: http://smmok.pro/go/videoseed.html

Евгений

02.10.2014, 14:09

Эмм..даже незнаю как это назвать.

0,05 за просмотр))шутники какие-то там сидят)

Добрый Админ

02.10.2014, 17:05

Евгений, ну это очень часто у них бывает))) самое прикольное, что кто-то это еще показывает))

Евгений

02.10.2014, 22:48

Stryker, я показал)))пока ценц не увидил 😀

ARKuzovov

06.10.2014, 06:52

Было бы круто, если бы была возможность размещать видео по расписанию до окончания бюджета компании. ..

webmaster

11.10.2014, 23:43

Viboom на данное время почему обходит всех! хотя пол года назад все на равне держались, уже неделю жду videoseed доступных компаний(

hurrikane

14.10.2014, 08:01

Эмм..даже незнаю как это назвать.
0,05 за просмотр))шутники какие-то там сидят)

Есть товар, есть купец. Кому-то и этого достаточно;)

Эмм..даже незнаю как это назвать.
0,05 за просмотр))шутники какие-то там сидят)
ну чистая прибиль 2копейки…что тут плохого?

hurrikane

18.10.2014, 21:41

Viboom на данное время почему обходит всех! хотя пол года назад все на равне держались, уже неделю жду videoseed доступных компаний(

Мало стало доходу от них, это правда. Видать сдыхают

Добрый Админ

29.05.2015, 16:09

Сижу, никого не трогаю — приходит SMS, мол новая кампания от 40 копеек, все дела…

При этом в кабинете картина следующая:
http://dl2.joxi.net/drive/0010/3709/700029/150529/249e2ca263. jpg

Товарищи, это спам. Я понимаю что вам чешется о себе напомнить, но не такими же методами?

FFFFAAAA

29.05.2015, 16:22

Сижу, никого не трогаю — приходит SMS, мол новая кампания от 40 копеек, все дела…

При этом в кабинете картина следующая:

http://dl2.joxi.net/drive/0010/3709/700029/150529/249e2ca263.jpg

Товарищи, это спам. Я понимаю что вам чешется о себе напомнить, но не такими же методами?

Тоже самое, 20 минут назад пришла смска. И походу выплаты не будет сегодня http://smmok.pro/images/icons/icon8.gif

Добрый Админ

29.05.2015, 17:22

И походу выплаты не будет сегодня

Ага… так и есть)

Уважаемый партнер, нам крайне неприятно сообщать эту новость, но мы вновь вынуждены перенести выплату на будущую неделю, причина этому — неоплаченные счета со стороны рекламодателей. Хотим заверить Вас, что все проверки аккаунтов были проведены, нарушители наказаны. Как только средства от рекламодателей будут перечислены на наш счет, мы тотчас проведем выплаты за последние периоды.

FFFFAAAA

05.06.2015, 15:07

:bad: Походу и на этой неделе мы без выплат остались..

Добрый Админ

05.06.2015, 15:24

FFFFAAAA, ну я с ними практически не работаю, поэтому мне без разницы)
Количество просмотров по статистике и, соответственно, заработок там ниже в раза два. Сколько я уже не тестировал… то ли они считать просмотры не умеют, то ли режут их, то ли шейвят — не знаю.

Добрый день, подскажите, пожалуйста, как к рекламному ролику с Видеосида прикрепить вирусную картинку? Ведь видео публикуется так, что возможности вставить картинку потом нет. Неоднократно встречались такие записи, а вот как это сделать? На мой тикет в Видеосиде мне ответили банальной отпиской — «Партнеры самостоятельно, без нашего участия вносят изменения в оригинальные посты, после чего согласовывают с нами отредактированную запись.

С уважением, служба поддержки VideoSeed.»

Заранее, благодарю.

Добрый Админ

06. 07.2015, 00:09

Natmina, ну вот как-то вытаскиывают ссылку на видео…)
Надо искать, неужели Видеосид сам не помогает в этом?

Natmina, ну вот как-то вытаскиывают ссылку на видео…)
Надо искать, неужели Видеосид сам не помогает в этом?

Ну вот как-то да, как-то вытаскивают. А как? )) Пыталась сама поковыряться в коде — не получилось добыть ссылку. Искать — искала. Уже обгуглилась вся…:crazy:

Андрей123

14.07.2015, 14:45

Были случаи что банили группу из-за размещения видео этой партнерки с промо или без???

Андрей123

26.07.2015, 19:58

Кто подскажет, нужно ли удалять видео видеосид когда заканчивается кампания что бы избежать бана группы?

Добрый Админ

26.07.2015, 20:06

Кто подскажет, нужно ли удалять видео видеосид когда заканчивается кампания что бы избежать бана группы?
Естественно нужно. Но не чтобы избежать бан, а чтобы бесплатно не крутить рекламу))

Андрей123

26.07. 2015, 20:08

Естественно нужно. Но не чтобы избежать бан, а чтобы бесплатно не крутить рекламу))

но удалять нужно обязательно когда закончится площадка или можно удалять предыдущий пост с рекламой вылаживая новый?

Добрый Админ

26.07.2015, 20:13

Андрей123,

когда закончится площадка
Какая площадка?

можно удалять предыдущий пост с рекламой вылаживая новый?
Можно.

Андрей123

26.07.2015, 20:20

ну не рекламная площадка а рекламная кампания

Алексей Бороисович

21.12.2015, 01:28

Не плохая вроде партнерка,но просмотры все не засчитывают. Пишешь,пишешь им по этому поводу,но они дурака включают. Бесполезно в общем. Жадность у них по ходу зашкаливает(((

Не советую с данной партнеркой работать половину показов не зачитывает.
Стал работать с viboom сколько в плеере ОК написано столько и статистике.

boroboro

24.02.2018, 15:34

Работал с ними раньше, но потом стали очень мало просмотров засчитывать и ушел в другой сервис где их как надо засчитывали.

vBulletin® v3.8.8, Copyright ©2000-2021, vBulletin Solutions, Inc. Перевод: zCarot

SMMOK-FB.Ru Обзор | SMMOK-FB.Ru законный или афера? | SMMOK-FB.Ru Платежное подтверждение | HamziOnline24

SMMOK-FB.Ru Обзор | SMMOK-FB.Ru законный или афера? | SMMOK-FB.Ru Платежное подтверждение | HamziOnline24

Зарабатывай, любя страницы в Facebook. Это мой обзор SMMOK-FB.Ru. Из этой статьи вы получите глубокие знания о SMMOK-FB.RU , которые помогут вам на нем заработать. Этот российский сайт специализируется на маркетинге в Facebook.и позволить клиентам получать больше лайков, комментариев и показателей вовлеченности на странице facebook. А вы зарабатываете деньги как рабочий. Ставки разные для разных задач. В этой статье я также поделюсь своим Подтверждением оплаты Smmok-fb.ru.


О компании Smmok-fb.ru:


SMMOK-FB.RU — российская платформа, где россияне могут зарабатывать деньги, оставляя лайки, комментируя и взаимодействуя на Facebook . Работая на Smmok-fb.ru, , вы можете зарабатывать деньги, имея свой аккаунт в facebook. Любой может зарегистрироваться для новой учетной записи. Все, что вам нужно, чтобы в вашем аккаунте Facebook было не менее 30 друзей.
Для начала работы на SMMOK-FB.RU, вам необходимо зарегистрировать новый аккаунт. Для регистрации вам нужно нажать на кнопку ниже.
+ Нажмите кнопку ниже.
+ Зарегистрируйте новую учетную запись.Для регистрации укажите

  • Ваш e-mail
  • и пароль

+ После этого нажмите на подписку и подтвердите свой адрес электронной почты.
+ Здесь актуальная статистика работы. Теперь нажмите «Я хочу заработать»

+ Теперь перейдите на facebook.com и скопируйте ссылку на свою учетную запись.

+ Вернитесь на SMMOK-FB.ru и заполните форму.

После заполнения формы подождите 24 часа, и вы получите ответ через 24 часа.


 После получения одобрения от SMM-OK.Ru вы можете начать лайкать страницы facebook и зарабатывать деньги.

Обзор SMMOK-FB.Ru | Является ли SMMOK-FB.Ru законным или мошенничеством?

Это 100% легальная платформа для зарабатывания денег, ставя лайки и комментируя страницы Facebit ok. По сути, это рекламная компания в социальных сетях, которая помогает людям получать настоящие лайки и обязательства на своих услугах, а взамен вы получаете деньги.Это 100% легальная платформа. Вам нужно Подтверждение оплаты? Кликните сюда.

Табачный дым вызывает и изменяет иммунные реакции легких, вызывая воспаление, аллергию, астму и другие заболевания легких: механистический обзор

Легкое напрямую подвергается воздействию антигенов окружающей среды, включая патогены, аллергены и токсины, такие как табачный дым. Для обеспечения защиты от вредных агентов был разработан широкий спектр механизмов защиты хозяина, включающих как врожденные, так и адаптивные иммунные ответы. Множество доказательств указывает на то, что хроническое воздействие табачного дыма изменяет иммунные и воспалительные процессы в легких, вызывая изменения гуморальных и клеточно-опосредованных иммунных ответов () [99]. Однако влияние сигаретного дыма на иммунную систему разнообразно и имеет двойную природу — провоспалительную и иммунодепрессивную. Из-за различий в характере курения (как выкуривается сигарета, количество затяжек, объем затяжки, продолжительность затяжки и т. Д.), А также возраста, пола, происхождения и социально-экономического статуса, влияние табачного дыма на иммунную систему может варьируются между курильщиками и людьми, подвергшимися пассивному воздействию.Наше понимание эффектов, вызванных CSE, дополнительно осложняется иногда противоречивыми результатами исследований на людях и экспериментальных установок, вероятно, из-за химической гетерогенности сигаретного дыма, индивидуальной генетической предрасположенности и вариативности экспериментальных методологий (например, времени, частоты и режим экспозиции). В дополнение к этому, кажется, что количество вдыхаемых общих твердых частиц (TPM) имеет большое влияние на продолжительность и характер реакции на сигаретный дым.Действительно, Дворкин-Гева и др. недавно продемонстрировал, что воспаление, вызванное сигаретным дымом, является функцией TPM с низкими концентрациями TPM, активирующими ксенобиотические механизмы и механизмы детоксикации, и высокими концентрациями TPM, вызывающими дополнительную воспалительную реакцию, потенциально вызывающую повреждение тканей [100]. Поэтому необходимо отметить, что большинство доступных и рассмотренных здесь отчетов основаны на исследованиях на животных моделях и клеточных линиях. Следует подчеркнуть, что эффекты пассивного курения в экспериментальных установках не могут быть напрямую переведены на последствия воздействия табачного дыма в окружающей среде на детей.

Провоспалительные свойства сигаретного дыма хорошо известны [101,102,103]. Сигаретный дым способствует воспалению, индуцируя выработку провоспалительных цитокинов, таких как TNF-α, IL-1, IL-6, IL-8 и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), и увеличивая накопление иммунные клетки в дыхательных путях [104,105]. С другой стороны, результаты многих исследований in vitro подтверждают его иммуносупрессивные свойства [2,106,107]. В частности, ингибирующие эффекты сигаретного дыма связаны, среди прочего, с никотином.Было показано, что никотин снижает выработку IL-6, IL-8 и IL-10 [108]. Один из потенциальных никотин-индуцированных иммуносупрессивных путей связан с активацией его никотинового ацетилхолинового рецептора α7 на макрофагах, Т-клетках и В-клетках. Важно отметить, что эта активация подавляет ответы Th2 и Th27 с реципрокным сдвигом в сторону линии Th3 [107]. Это дополнительно осложняется соединениями, демонстрирующими как провоспалительные, так и иммунодепрессивными свойствами, такими как акролеин — еще один важный компонент табачного дыма.Хотя вдыхание акролеина способствует реакции гиперчувствительности дыхательных путей, оно может стимулировать накопление нейтрофилов в дыхательных путях, тем самым способствуя иммунной толерантности [109].

4.1. Влияние воздействия сигаретного дыма на врожденный иммунитет

Врожденные защитные механизмы дыхательных путей и легких включают структурные компоненты, кашлевой рефлекс, мукоцилиарный клиренс, эпителиальный барьер, гуморальные факторы (белки сурфактанта, белки комплемента, антимикробные пептиды) и клетки, вызывающие иммунную реакцию. ответы (эпителиальные клетки, макрофаги, моноциты, дендритные клетки, нейтрофилы, естественные клетки-киллеры и тучные клетки).С одной стороны, исследования Botelho et al. и D’Hulst et al. продемонстрировали, что врожденных иммунных механизмов достаточно для стимулирования вызванного сигаретным дымом воспаления в дыхательных путях [12, 110]. Количество нейтрофилов, макрофагов и дендритных клеток в дыхательных путях курильщиков и животных, подвергшихся воздействию дыма, увеличивается в несколько раз по сравнению с контрольной группой [14,111,112]. Этот приток воспалительных клеток приводит к обострению воспалительных процессов, высвобождению форм кислорода, цитокинов и хемокинов и активации протеаз.С другой стороны, сигаретный дым подавляет локальную врожденную защиту хозяина в дыхательных путях, что подтверждается снижением продукции белков сурфактанта SP-A и SP-D. В то время как SP-A и SP-D стимулируют фагоцитоз определенных микроорганизмов лейкоцитами, подавление их синтеза явно способствует индуцированной дымом иммуносупрессии [113].

4.1.1. Эпителиальные клетки

Респираторный эпителий является первой линией защиты от вредных воздействий окружающей среды, в частности от патогенов, вдыхаемых вредных частиц и аллергенов.Однако эпителий дыхательных путей не просто служит физическим барьером, препятствующим проникновению потенциально вредных материалов, но играет ключевую роль в регуляции баланса жидкости, метаболизма и выведения вдыхаемых агентов, а также регуляции иммунологических и воспалительных реакций путем выделения воспалительных веществ. медиаторы и рекрутирующие иммунные клетки [114]. Что касается аллергической сенсибилизации к вдыхаемым антигенам, эпителий дыхательных путей способен распознавать аллергены посредством экспрессии рецепторов распознавания образов (PRR) и вызывать врожденные иммунные ответы [115].

Эпителий дыхательных путей состоит из множества специализированных типов эпителиальных клеток, таких как реснитчатые, слизистые, бокаловидные, клетки Клары и базальные клетки бронхиального эпителия, а также клетки типа I и типа II в альвеолярном эпителии [116]. Чтобы сформировать относительно непроницаемый барьер, эти клетки соединяются плотными и адгезивными соединениями, которые образуют апикальный соединительный комплекс (AJC). Физический барьер также поддерживается мукоцилиарным барьером, включающим реснички, слой перицилиарной жидкости (золь) и слой слизи (гель).Мукоцилиарный клиренс обеспечивается организованными движениями ресничек, которые удаляют загрязнители и вдыхаемый твердый материал из дистальных отделов дыхательных путей к глотке [117]. CSE искажает структуру и функцию цилиарного эпителия по ряду механизмов. Результаты исследований in vitro и моделей на животных показывают повышенное сопротивление дыхательных путей и утолщение стенок дыхательных путей, увеличение количества слизистых, секретирующих бокаловидные клетки и тучных клеток. Одновременное уменьшение количества Clara и цилиарных клеток приводит к подавлению секреции множества противовоспалительных, иммуномодулирующих и антибактериальных молекул, которые жизненно важны для защиты хозяина от патогенов [118,119,120,121,122,123,124,125].

Другие изменения, вызванные курением, включают повышенную проницаемость респираторного эпителия и нарушение мукоцилиарного клиренса в результате чрезмерного продуцирования слизистой, снижение цилиогенеза, укорочение ресничек и снижение частоты биений ресничек [117,118,120,126,127,128,129]. Увеличение проницаемости эпителия связано с изменениями в структуре и функции цитоскелета и AJC, а также с изменениями в транспорте ионов и снижением трансэпителиальной резистентности [121,126,127,128,129,130].Кроме того, гены, участвующие в формировании плотных контактов, ген внутрижгутикового транспорта и гены, связанные с ресничками, заметно подавляются в эпителии дыхательных путей здоровых курильщиков по сравнению с некурящими [131]. Курение также было связано с более высокой экспрессией гена ядра MUC5AC [132]. MUC5AC — одна из преобладающих форм муцина в дыхательных путях человека, которая может представлять собой острую реакцию на воздействие окружающей среды [116]. Повышенная экспрессия MUC5AC у курильщиков может привести к гиперсекреции слизи и последующему ухудшению мукоцилиарного клиренса. Недавно было показано, что сигаретный дым увеличивает продукцию MUC5AC, стимулированную TLR3, в эпителиальных клетках дыхательных путей, главным образом посредством передачи сигналов киназами, регулируемыми внеклеточными сигналами (ERK) [133]. Эффект частично объясняется окислительным стрессом.

Курение сигарет изменяет воспалительные реакции, вызываемые респираторными эпителиальными клетками, путем модуляции выработки ряда мощных провоспалительных цитокинов и хемокинов с последовательным привлечением макрофагов и нейтрофилов и дальнейшим повреждением легочной ткани.Этот провоспалительный ответ эпителиальных клеток на CSE достигается путем изменения различных сигнальных путей, участвующих в клеточной активации, в первую очередь протеинкиназы C (PKC), митоген-активной протеинкиназы (MAPK), NFκB и активирующего протеина-1 (AP- 1) пути [102, 134, 135, 136]. Например, воздействие сигаретного дыма на линии клеток бронхиального эпителия человека увеличивало высвобождение нейтрофилов хемоаттрактанта IL-8, IL-1β, моноцитарного хемоаттрактанта белка 1 (MCP-1), TNFα, растворимой молекулы межклеточной адгезии 1 (sICAM-1), и GM-CSF [101, 102, 104, 137, 138]. В то время как ИЛ-8 является одним из самых мощных хемоаттрактантов нейтрофилов, ИЛ-1β вызывает активацию макрофагов и высвобождение нейтрофилов из костного мозга, способствуя выработке GM-CSF, и, таким образом, может играть роль в усилении окислительного взрыва и поддержании воспаления тканей. в дыхательных путях [139]. Разрушению легочной ткани способствует накопление нейтрофилов, моноцитов и NK-клеток в дыхательных путях во время воспаления, вызванного дымом, и повышенной экспрессии ММП [140, 141].Хотя сигаретный дым является мощным индуктором нейтрофильного воспаления, было также показано, что он индуцирует в эпителиальных клетках дыхательных путей синтез стромального лимфопоэтина тимуса (TSLP), известного активатора дендритных клеток, способствующих поляризации Th3 [142]. Эпителиальные клетки дыхательных путей являются основным источником TSLP, IL-25 и IL-33, которые регулируют перед каноническими цитокинами Th3: IL-4, IL-5 и IL-13 и, таким образом, вызывают иммунный ответ типа THh3 [ 143]. Следовательно, повышенное производство TSLP является потенциальным механизмом, с помощью которого сигаретный дым может вызвать аллергическое воспаление в дыхательных путях [142,144].

Эпидемиологические данные ясно показывают, что воздействие сигаретного дыма способствует развитию инфекций верхних и нижних дыхательных путей. Идентификация эксклюзивных микробных молекул, патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMP), опосредуется через PRR, экспрессируемые на поверхности эпителиальных клеток, макрофагов и дендритных клеток. Семейства PPR включают Toll-подобные рецепторы (TLR), пуринергические рецепторы (например, P2X и P2Y), цитозольные нуклеотид-связывающие домены олигомеризации (NOD) -подобные рецепторы (NLR) и рецепторы конечных продуктов гликирования (RAGE).Хотя PRR необходимы для выработки воспалительной реакции на вторжение патогенов, они также активируются эндогенными молекулами, высвобождаемыми из поврежденных или умирающих клеток, называемыми молекулярными паттернами, связанными с повреждением (DAMP), такими как двухцепочечная ДНК, высокоподвижный блок группы 1 белок теплового шока 70, митохондриальная ДНК и АТФ. Сигаретный дым является известным индуктором некротической и апоптотической гибели клеток с последующим высвобождением DAMPs [145]. Недавно было показано, что индуцированный сигаретным дымом эпителиальный некроптоз и высвобождение DAMPs увеличивают высвобождение CXCL8 и IL-6 в зависимости от гена первичного ответа миелоидной дифференцировки 88 [146].Кажется правдоподобным, что сигаретный дым вызывает воспаление дыхательных путей за счет прямого окислительного повреждения эпителия, а также за счет активации различных PRR посредством DAMP, высвобождаемых после повреждения клеток. Действительно, даже кратковременного воздействия сигаретного дыма достаточно для увеличения секреции провоспалительных цитокинов и экспрессии нескольких TLR (например, TLR-2 и TLR-4) в эпителиальных клетках [105, 137, 139, 147, 148]. Mortaz et al. продемонстрировали, что индуцированное сигаретным дымом высвобождение CXCL8 опосредуется через TLR4, TLR9 и активацию инфламмасом, и что вовлечены рецепторы P2X7 и активные формы кислорода [149]. Кроме того, активация пуринергического рецептора P2X7 играет центральную роль в активации NLRP3 инфламмасомы и каспазы 1, которые способствуют высвобождению IL-1β и IL-18 [150, 151]. Несмотря на эти результаты, остается много неоднозначного отношения к влиянию сигаретного дыма на экспрессию TLR. В частности, было показано, что TLR-5 подавляется в дыхательных путях курильщиков, что может объяснить связанную с курением восприимчивость к инфекции дыхательных путей жгутиковыми бактериями [152].

С другой стороны, CSE оказывает иммуносупрессивное действие на механизмы антимикробной защиты эпителия дыхательных путей.Стимуляция подвергшихся воздействию дыма эпителиальных клеток с помощью PAMP, таких как липополисахарид (LPS) или дцРНК, а также воздействие риновируса человека, нетипируемого Haemophilus influenzae (NTHI), Staphylococcus aureus и in vitroxella catarrhalis, уменьшали продукцию Moraxella catarrhalis. мощных провоспалительных медиаторов, в частности, индуцированных патогенами цитокинов, мобилизующих нейтрофилы [136, 153, 154, 155, 156]. Высвобождение белков GM-CSF и IL-8 из эпителиальных клеток в ответ на LPS, компонент внешней мембраны грамотрицательных бактерий, снижается после воздействия сигаретного дыма [136].Точно так же стимуляция эпителиальных клеток поли (I: C), миметиком вирусной двухцепочечной РНК (дцРНК), приводила к дозозависимому снижению инициирования противовирусного ответа и продукции интерферона [153]. Кроме того, способность эпителиальных клеток синтезировать антимикробные пептиды, такие как CCL20, β-дефенсин 1 и 2 и SLPI, подавляется в присутствии сигаретного дыма [56, 157]. Это снижение врожденных иммунных ответов способствует нарушению защиты от бактериальных и вирусных инфекций, замедлению выведения патогенов и хронической колонизации нижних дыхательных путей патогенами [158,159].Недавно усиленная адгезия бактерий к эпителию дыхательных путей была продемонстрирована для Streptococcus pneumoniae [160]. Более того, притупленный антимикробный ответ, по-видимому, связан с вызванной CS модуляцией организации цитоскелета и профилей воспалительных клеток во время инфекций, что может способствовать дальнейшему разрушению легочной ткани [161, 162]. Однако точные механизмы, лежащие в основе вызванного сигаретным дымом нарушения защиты от бактериальных и вирусных агентов, полностью не изучены, и необходимы дальнейшие исследования.

В совокупности эпителиальные клетки действуют как первая линия защиты от вредного воздействия сигаретного дыма. Воздействие сигаретного дыма приводит к повышенной проницаемости респираторного эпителия, гиперпродукции слизистой оболочки, нарушению мукоцилиарного клиренса, усиленному высвобождению провоспалительных цитокинов и хемокинов с последовательным привлечением макрофагов и нейтрофилов, а также к изменению чувствительности и клиренса патогенов.

4.1.2. Альвеолярные макрофаги

Альвеолярные макрофаги (АМ) представляют собой наиболее распространенный тип иммунных клеток в воздушном пространстве здоровых людей.Они являются наиболее заметными фагоцитами и антигенпрезентирующими клетками в легких и вместе с эпителиальными клетками составляют первую линию защиты от инфекций и вредных агентов. Помимо иммунного надзора, реакции на инфекции и микробной очистки, их функции включают удаление клеточного мусора, поддержание гомеостаза легочной ткани и управление разрешением воспаления.

На сегодняшний день многочисленные исследования доказали, что воздействие сигаретного дыма увеличивает количество альвеолярных макрофагов в дыхательных путях в несколько раз и вызывает изменения их морфологии и фенотипа [163,164].Отличительные морфологические изменения AM, вызванные сигаретным дымом, включают увеличение размера клеток, а также увеличение количества пузырьков Гольджи, эндоплазматического ретикулума и остаточных тел, которые содержат характерные включения, похожие на волокна [165]. Частично увеличение размера клеток можно объяснить накоплением внутриклеточных липидов. Вскоре после воздействия сигаретного дыма AM накапливают липидные капли, предположительно из-за окисления липидов поверхностно-активного вещества. Это приводит к увеличению продукции IL-1β и GM-CSF и вызывает воспаление легких [166, 167].

Сигаретный дым изменяет экспрессию молекул адгезии на поверхности AM, полученных от курильщиков [164,168]. AM в индуцированной мокроте курильщиков экспрессировали CD11b, CD14, CD54 и CD71 в большей степени, чем AM у некурящих, а экспрессия CD11b и CD14 была связана с серьезным ограничением воздушного потока [164]. Эти изменения могут, возможно, влиять на метаболическую активность, межклеточную коммуникацию, адгезию, пролиферацию и созревание альвеолярных макрофагов [169]. Действительно, альвеолярные макрофаги курильщиков демонстрируют более высокий метаболизм в состоянии покоя, повышенную секрецию лизоцима и активность лактатдегидрогеназы, эстеразы и протеазы по сравнению с некурящими [165, 170, 171].

Макрофаги демонстрируют значительную фенотипическую пластичность, позволяющую им адаптироваться к окружающей среде, в которой они находятся. В соответствии с их статусом активации, макрофаги были широко классифицированы либо как классически активированные макрофаги M1, либо как альтернативно активированные макрофаги M2, параллельно с поляризацией Т-хелперных клеток [172]. Передача сигналов TLR и цитокины, секретируемые Th2-лимфоцитами, такие как интерферон-γ (IFN-γ), индуцируют фенотип M1. Макрофаги M1 проявляют повышенные противомикробные свойства, выделяют провоспалительные цитокины, такие как TNF-α, IL-6 и IL-12, и, таким образом, способствуют формированию среды Th2 [173].Переключение в сторону поляризации M2 обычно индуцируется IL-4 и IL-13 [174]. Макрофаги M2 обладают противовоспалительным профилем и продуцируют противовоспалительные цитокины, такие как IL-10 и трансформирующий фактор роста-β (TGF-β). Макрофаги M2 участвуют в инкапсуляции и уничтожении паразитов, иммунорегуляции, отложении матрикса и ремоделировании тканей. Было показано, что воздействие сигаретного дыма вызывает уникальную картину поляризации макрофагов, отмеченную подавлением M1 и индукцией сигнатур генов, связанных с M2 [175, 176, 177].Влияние сигаретного дыма на поляризацию макрофагов многогранно и не ограничивается изменениями цитокиновой среды легких. Секреция протеазы серинового члена S31 (Prss31) из тучных клеток, происходящих из костного мозга, была связана с инфильтрацией макрофагов и повышенной поляризацией M2 [178]. Более того, сигаретный дым может изменять не только фенотип макрофагов, но также влиять на поляризацию моноцитов крови и костного мозга [179,180]. Эта асимметричная поляризация макрофагов находит свое отражение в недавно продемонстрированном гетерогенном отложении макрофагов в дыхательных путях у курильщиков и пациентов с ХОБЛ [181].Преобладание провоспалительных клеток М1 было обнаружено в малых дыхательных путях, тогда как макрофаги М2 преобладали в просветных областях. Как у здоровых курильщиков, так и у пациентов с ХОБЛ наблюдались повышенные уровни цитокинов фенотипа М2 в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ), соответствующие профилю М2 просветных макрофагов. Влияние сигаретного дыма на поляризацию фенотипа макрофагов имеет последствия, выходящие далеко за рамки ХОБЛ. Действительно, макрофаги M1 и M2 вносят вклад в патогенез астмы [173]. Макрофаги M1 высвобождают IL-23 и IL-1β, которые способствуют ответам Th2 и Th27, связанным с нейтрофилией дыхательных путей и острой гиперчувствительностью дыхательных путей. IL-14 и IL-13, ключевые цитокины астмы, индуцируют поляризацию макрофагов в направлении профиля M2, что дополнительно способствует ремоделированию Th3-среды и дыхательных путей. В модели астмы, вызванной клещами домашней пыли (HDM), на мышах фенотипы макрофагов отражали изменения тяжести аллергического воспаления дыхательных путей [182]. Более высокое количество макрофагов M1 наблюдалось у мышей с менее тяжелой астмой, в то время как увеличение количества макрофагов M2 после воздействия HDM коррелировало с более высоким количеством эозинофилов. По-видимому, макрофаги M1 играют двойную роль при астме, предотвращая аллергическую сенсибилизацию, с одной стороны, но способствуя развитию тяжелого фенотипа при уже установленном заболевании, с другой.

Альвеолярные макрофаги являются мощными индукторами воспаления и деградации тканей. Воспаление легких у курильщиков увековечивается дисбалансом протеаза / антипротеаза и прямым и непрямым повреждением клеток, связанным с высвобождением активированных промежуточных продуктов O 2 . Курение вызывает выработку и активность ММП, ответственных за деградацию внеклеточного матрикса, и изменяет продукцию их биологических ингибиторов, тканевых ингибиторов ММП (ТИМП), высвобождаемых альвеолярными макрофагами.Уровни MMP-9 и MMP-12 были увеличены в образцах БАЛ от курильщиков, и было показано, что как MMP-9, так и MMP-12 составляют большую часть активности эластазы, вызванной альвеолярными макрофагами [183 184 185 186]. В совокупности дисбаланс между MMP и TIMP приводит к недостаточному восстановлению легочной ткани и способствует патогенезу эмфиземы у курильщиков. Более того, AM курильщиков демонстрируют повышенное высвобождение окислителей, таких как супероксид-анион и H 2 O 2 , чем макрофаги некурящих [187].Например, макрофаги курильщиков способны окислять активный центр альфа-1-антитрипсина, основной антинейтрофильной эластазы нижних дыхательных путей человека, что приводит к его инактивации и способствует дальнейшему повреждению легких [188].

Хотя количество альвеолярных макрофагов увеличивается в ЖБАЛ курильщиков, большое количество данных свидетельствует о том, что эти клетки функционально нарушены [189,190,191,192,193,194]. В частности, способность выделять провоспалительные цитокины (например,g., Il-1, IL-5, Il-6, IL-8, IL-12, TNF-α, IP-10, MCP-1, MIP-1α и VEGF), по-видимому, существенно снижается после CSE и По-видимому, подразумевается окислительный стресс [195,196]. Это объясняет, по крайней мере частично, почему AM курильщиков вырабатывают притупленный воспалительный ответ после стимуляции LPS, что приводит к повышенной восприимчивости к инфекциям [193,197,198,199]. Действительно, сигаретный дым существенно снижает способность альвеолярных макрофагов фагоцитировать бактерии и апоптотические клетки [159,197,200,201,202,203].Пониженная скорость бактериального клиренса была продемонстрирована для таких важных патогенов дыхательных путей, как H. influenzae , L. monocytogenes , L. pneumophila , P. aeruginosa , S. pneumoniae и C. albicans [159,202,200 ]. Механизмы, лежащие в основе этого общепризнанного подавления фагоцитоза, включают индуцированные дымом изменения в способности воспринимать PAMP и убивать бактерии. В частности, нарушенная экспрессия PRR на альвеолярных макрофагах может влиять на распознавание бактериальных агентов и изменять последующую внутриклеточную передачу сигналов и нижестоящие эффекторные механизмы.Недавно было показано, что сигаретный дым снижает количество белка NLRP3, рецептора, подобного нуклеотидсвязывающей олигомеризации (NOD) (NLPR), за счет облегчения его убиквитинирования [204]. Параллельно CSE был связан с нарушением активации TLR-2 и TLR-4-связанных сигнальных путей в альвеолярных макрофагах в ответ на агонисты (например, LPS) и инфекцию Aspergillus [205, 206, 207]. Короче говоря, TLR2 играет роль в распознавании липопротеинов и липопептидов грамположительных бактерий, микоплазм и микобактерий, тогда как TLR-4 является ключевым рецептором для LPS грамотрицательных бактерий [208, 209].Однако другие результаты показывают, что сигаретный дым не просто подавляет иммунные ответы AM, но, скорее, искажает их воспалительный профиль [210]. Альвеолярные макрофаги от мышей, подвергшихся воздействию дыма, зараженных нетипируемым препаратом Haemophilus influenzae , вызвали повышенные уровни медиаторов воспаления, таких как MCP-1, MCP-3, MCP-5, IP-10 и MIP-1γ, тогда как экспрессия pro- воспалительные цитокины, а именно TNF-α, IL-1β, IL-6, были снижены по сравнению с контрольными мышами, зараженными бактериями.Следует отметить, что этот измененный воспалительный профиль был связан с обострением воспалительной реакции, которая носила нейтрофильный характер. Повышенные уровни CXCL8 и количество нейтрофилов обычно обнаруживаются в дыхательных путях пациентов с ХОБЛ с бактериальной колонизацией. Соответственно, подавляющий эффект CSE на экспрессию провоспалительных цитокинов не распространяется на CXCL8, мощный хемоаттрактант нейтрофилов [199].

Из-за нарушения распознавания патогенов и измененного иммунного ответа AM курильщиков проявляют пониженные фагоцитарные свойства.Множество доказательств указывает на то, что CSE ухудшает бактериальный клиренс и увеличивает выживаемость бактерий в дыхательных путях [159, 202, 211]. Воздействие сигаретного дыма было связано со снижением бактерицидных или бактериостатических свойств, подавлением слияния фаголизосом и нарушением аутофагии, вероятно, связанным с окислительным стрессом [200, 212, 213]. Кроме того, было показано, что сигаретный дым снижает презентацию основного антигена класса I гистосовместимости (MHC I) за счет подавления активности иммунопротеасомы [214].Поскольку опосредованная MHC I презентация антигена CD8 + Т-клеткам имеет решающее значение для усиления иммунного ответа против инфицированных вирусом клеток, сигаретный дым может ослаблять противовирусные иммунные ответы. Это согласуется со снижением уровней MHC I в альвеолярных макрофагах, наблюдаемым у курильщиков с ХОБЛ [215].

Помимо неэффективного бактериального клиренса, нарушение фагоцитарных свойств альвеолярных макрофагов является причиной неэффективного фагоцитоза апоптозных эпителиальных клеток бронхов, процесса, называемого «эффероцитоз».Дефектный эффероцитоз способствует утечке содержимого апоптотических клеток в окружающую ткань, подвергая соседние клетки воздействию вредных внутриклеточных компонентов, таких как ферменты (например, протеазы и каспазы) и оксиданты. Накопленные апоптотические клетки могут подвергаться вторичному некрозу, способствующему сохранению воспаления и приводящему к стойкому повреждению тканей даже после прекращения курения [145]. Нарушенный эффероцитоз с аномальным накоплением апоптотических эпителиальных клеток в просвете дыхательных путей убедительно документирован у пациентов с ХОБЛ [216].Было показано, что сигаретный дым снижает экспрессию некоторых узнающих молекул на поверхности альвеолярных макрофагов, а именно CD31, CD91, CD44 и CD71, которые необходимы для взаимодействия между эпителием и макрофагами и эффективного удаления апоптотических клеток и тканевого мусора [217]. Нарушение эффероцитоза альвеолярными макрофагами, по-видимому, является важным фактором обострения клеточного воспаления не только при ХОБЛ, но также при астме, облитерирующем бронхиолите, затяжном бактериальном бронхите и бронхоэктазах у детей [216, 218, 219, 220, 221].В последнее время значительный акцент был сделан на роли метаболитов сфинголипидов в индуцированном сигаретами нарушении эффероцитоза с передачей сигналов сфингозин-1-фосфата (S1P), что привлекло особое внимание [222, 223, 224, 225]. Нисходящие сигнальные пути S1P участвуют во врожденных и адаптивных иммунных ответах, в частности, в переносе и дифференцировке лейкоцитов. Недавно обнаруженное несоответствие в экспрессии Spinster 2 (Spns2), переносчика S1P плазматической мембраны, между AM и эпителиальными клетками, предполагает, что вызванное сигаретным дымом нарушение фагоцитарных свойств AM может быть следствием нарушенного перекрестного взаимодействия между этими двумя типами клеток. [223].Эти наблюдения представляют интерес, поскольку было показано, что передача сигналов S1P участвует в воспалении дыхательных путей и гиперчувствительности, а также в контактной гиперчувствительности замедленного типа [226]. В модели аллергической астмы, вызванной овальбумином (OVA), у мышей с нокаутом Spns2 наблюдалось снижение количества эозинофилов и лимфоцитов, а также увеличение количества макрофагов в ЖБАЛ, выработанный притупленный ответ типа Th3 со значительно сниженными уровнями IL-4, IL-13. и IL-5, и уменьшенная продукция антиген-специфических антител по сравнению с однопометниками дикого типа.Эти результаты показывают, что Spns2 участвует как в индукции воспалительного ответа типа Th3 в дыхательных путях, что является признаком аллергической астмы, так и в регуляции воспаления, вызванного Th2, при кожных заболеваниях [226].

В совокупности чистое воздействие сигаретного дыма на альвеолярные макрофаги заключается в значительном увеличении количества AM с одновременным существенным ухудшением их функции. Снижение фагоцитарной способности AM способствует усилению воспаления, повышенной восприимчивости к респираторным инфекциям и повреждению тканей.

4.1.3. Дендритные клетки

Дендритные клетки — самые важные антигенпрезентирующие клетки, уникально расположенные на границе между врожденной и адаптивной частью иммунной системы [227, 228]. Человеческие DC можно разделить на условные DC или «миелоидные» DC (mDC) и плазматические DC (pDC). ДК управляют дифференцировкой и активацией антиген-специфических Т-клеток в ответ на патогены. Это опосредуется презентацией антигена, экспрессией костимулирующих молекул и высвобождением иммуностимулирующих цитокинов [229].В зависимости от характера этих сигналов DC могут определять поляризацию ответа Т-клеток.

Активное курение существенно влияет на количество, распределение и дифференцировку DC и клеток Лангерганса (LC) в альвеолярной паренхиме человека [230]. Курение сигарет может снизить количество ДК слизистой оболочки бронхов у пациентов с ХОБЛ и астмой [231, 232]. Напротив, было показано, что непродолжительное курение увеличивает количество CD11b + DC в жидкости бронхоальвеолярного лаважа, что связано с сенсибилизацией и развитием астмы [233].

Несколько отдельных линий доказательств предполагают, что воздействие сигаретного дыма ухудшает созревание и функцию DC. ДК, подвергшиеся воздействию сигаретного дыма, демонстрировали пониженную способность стимулировать Т-клетки [234]. У астматических крыс экспрессия миелоидного фактора дифференцировки 88 (MyD88), IL-10 и IL-12 была снижена в DC костного мозга в результате воздействия сигаретного дыма [235]. Параллельно с этим созревание DC в лимфатических узлах нарушалось сигаретным дымом, о чем свидетельствует снижение экспрессии MHC II и костимулирующих молекул CD80 и CD86 на клеточной поверхности.Эти DC обладали пониженной способностью индуцировать продукцию IL-2 Т-клетками. Следует отметить, что нарушение функции Т-лимфоцитов, вызванное ДК, может привести к обострению ХОБЛ, снижению ответа на инфекцию и подавлению наблюдения за опухолью [236]. Однако на другой модели мышей было показано, что экстракт сигаретного дыма индуцирует внеклеточные ловушки нейтрофилов, которые, в свою очередь, были способны управлять созреванием и активацией плазмоцитоидных DC (pDC) [237].

CSE оказывает определенное влияние на реакцию контроллеров домена на инфекции.В то время как оба подтипа DC экспрессируют PRR, обеспечивая эффективное зондирование патогена, только pDC экспрессируют TLR-9, что облегчает распознавание вирусной двухцепочечной ДНК. Следовательно, pDC являются важным фактором врожденного противовирусного иммунитета. Было показано, что CSE увеличивает выработку IL-8, мощного хемоаттрактанта нейтрофилов, с одновременным подавлением высвобождения провоспалительных цитокинов (TNF-α и IL-6) после индукции TLR-9. Важно отметить, что CSE ослабляет продукцию IFN-α, ключевого противовирусного белка, путем подавления сигнального пути PI3K / Akt.Взятые вместе, эти данные показывают, что CSE может снижать противовирусный иммунитет с одновременной индукцией нейтрофильного воспаления [149]. Соответственно, CSE подавлял экспрессию TLR-7 и активацию фактора регуляции интерферона (IRF) -7 в инфицированных RSV pDC. RSV-индуцированное высвобождение INF-α, Il-1β, Il-10 и CXCL10 ингибировалось в pDC, что дополнительно демонстрирует, что ключевые функции pDC при вирусной инфекции нарушаются CSE [238]. Параллельно с этим сигаретный дым изменяет способность ДК вызывать антибактериальный ответ.Было показано, что никотин снижает как эндоцитарную, так и фагоцитарную способность незрелых ДК. Продукция цитокинов, таких как Il-10, Il-12, Il-1β и TNF-α, в ответ на бактериальные продукты была нарушена [239]. В частности, подавление продукции IL-12, мощного индуктора Th2-ответов, может потенциально способствовать притуплению механизмов защиты хозяина от инфекций, опосредованных DC, подвергнутыми воздействию никотина. Соответственно, наблюдалось, что CSE значительно снижает вызванное S. pneumoniae созревание ДК, происходящее из моноцитов, и подавляет способность ДК активировать антиген-специфический Т-клеточный ответ.В частности, снижение ответа pro-Th2 и -Th27, сопровождающееся устойчивой секрецией CXCL8, объясняет нарушение механизма антибактериальной защиты и усиление отложения нейтрофилов в дыхательных путях [234]. Однако данные о влиянии сигаретного дыма на выработку цитокинов в ДК противоречивы. В то время как подавленная продукция медиаторов воспаления (ИЛ-12 и ИЛ-23) была связана с активными формами кислорода или никотином, стимуляция ЛПС или лигандом CD40 приводила к усилению регуляции некоторых медиаторов воспаления (простагландин-E2, ИЛ-8 и ИЛ). -10) [240 241 242].

Существует много свидетельств того, что сигаретный дым способствует воспалению и аллергической реакции, опосредованной ДК. На мышиных моделях было показано, что короткое курение усиливает опосредованный дендритными клетками перенос аллергенов клещей домашней пыли во внутригрудные лимфатические узлы и вызывает локальный ответ Т-хелперных клеток 2 типа. Это было достигнуто путем избирательной регуляции поверхностной экспрессии C-C хемокинового рецептора 7 (CCR7) на DC дыхательных путей, стимулированной сигаретным дымом. Белок CCR7 имеет решающее значение для миграции DC в лимфатические узлы, что является ключевым этапом антигенпредставляющей функции DC дыхательных путей.Авторы приходят к выводу, что одновременное вдыхание аэрозольного овальбумина (OVA) и сигаретного дыма вызывает воспаление дыхательных путей Th3-типа, которое не наблюдалось после воздействия одного из этих агентов. Также было показано, что сигаретный дым вызывает повышенную регуляцию MHC класса II, CD86 (B7-2), PDL2 и понижающую регуляцию лиганда индуцируемого Т-клеточного костимулятора (ICOSL) на DC дыхательных путей. CD86 является костимулирующей молекулой, участвующей в инициации Th3-ответов и последующем развитии аллергического воспаления дыхательных путей.Таким образом, сигаретный дым может активировать легочные ДК, способствуя аллергической сенсибилизации против совместно вдыхаемых молекул. Такой перекос иммунного ответа, по-видимому, не зависит от TLR и объясняется присутствием иммунологических адъювантов в дыму [243]. Однако последующее исследование с использованием модели аллергического воспаления легких на мышах показало, что воздействие сигаретного дыма на ДК не просто способствует аллергическому воспалению дыхательных путей, но, скорее, изменяет баланс Th2 / Th3. Мыши, ранее сенсибилизированные и зараженные OVA, продемонстрировали снижение количества эозинофилов и подавление продукции IL-4 и IL-13 после воздействия сигаретного дыма.Воздействие сигаретного дыма, связанное с сенсибилизацией к OVA, уменьшало количество pDC и их активацию за счет подавления экспрессии CD86, PDL2 и ICOSL, чего было достаточно для уменьшения набора регуляторных Т-клеток и продукции IL-10 и TGF-β. Кроме того, сигаретный дым увеличивает рекрутирование ДК CD8α + в лимфатические узлы, что может объяснить увеличение количества и активацию CD8 + Т-клеток в легких [244].

В заключение, сигаретный дым может изменять иммунный профиль ДК различными способами, некоторые из которых противоречивы.Одно возможное объяснение очевидного парадокса было предложено Нури-Ширази и Гине, которые заявили, что ДК, развивающиеся в никотиновой среде, не способны поддерживать конечное развитие эффекторных клеток памяти Th2 из-за их дифференциальной экспрессии костимулирующих молекул CD86 и CD80 и отсутствия IL -12 производство [245]. Вполне вероятно, что ДК могут принимать на себя функцию стимулирования Th-1, которая необходима для борьбы с инфекциями, только когда баланс сигналов окружающей среды сильно благоприятствует иммунитету Th2 и способствует ответу Th3 в среде с предвзятостью Th3, что способствует развитию и обострению. астмы [246].

4.1.4. Natural Killer Cells

Natural Killer Cells (NK) — это большие гранулярные лимфоциты, похожие на цитотоксические лимфоциты, способные секретировать перфорин, гранзимы, TNF-α и IFN-γ, но неспособные перестраивать гены рецепторов Т-клеток или иммуноглобулинов [247]. NK-клетки отвечают за защиту от микробных агентов и наблюдение за опухолью. Это опосредуется Ca 2+ -зависимым экзоцитозом гранул, высвобождением цитотоксических белков (перфорин и гранзимы) из внутрицитоплазматических гранул, конститутивным или индуцированным при взаимодействии с клетками-мишенями, экспрессией FasL, Ca 2+ -независимым Fas (CD95 / Apo 1 ) -опосредованная индукция апоптоза, а также связанные с мембраной или секретируемые цитокины (например,g., TNF-α) [248].

CSE, как сообщается, подавляет и стимулирует активность NK-клеток. Активность NK-клеток в периферической крови была снижена у курильщиков по сравнению с некурящими. Эти изменения, по-видимому, обратимы, так как период восстановления в течение шести недель после прекращения курения вернул цитотоксическую активность NK-клеток к уровню, который никогда не курил [249]. NK-клетки от длительных курильщиков демонстрируют пониженную внутриклеточную концентрацию IL-16. Это истощение цитокина, рекрутирующего CD4 +, убедительно свидетельствует о том, что длительное курение может влиять на иммунные ответы на системном уровне и что в него вовлечены NK-клетки [250].Существует множество доказательств прямого отрицательного влияния сигаретного дыма на цитолитическую способность NK-клеток, а также на их способность вырабатывать воспалительные цитокины в ответ на микробные агенты. Mian et al. продемонстрировали, что сигаретный дым значительно подавляет индукцию IL-15 полиинозиновой: полицитидиловой кислотой (поли I: C) в мононуклеарных клетках периферической крови человека (PBMC). Это снижение продукции IL-15, которое было связано с ослабленным сигнальным преобразователем и активатором транскрипции (STAT) 3 и фосфорилированием STAT5, ставит под угрозу цитолитический потенциал NK-клеток [251].Также было показано, что продукция TNF- и IFN-γ NK-клетками снижается после обработки препаратами табачных изделий и стимуляции поли I: C и LPS [252]. Было обнаружено, что сигаретный дым ингибирует продукцию IFN-γ in vitro и ex vivo NK-клетками, индуцированными поли I: C. Продукция TNF-α после стимуляции поли I: C была также снижена у курильщиков по сравнению с некурящими, как и экспрессия перфорина и цитотоксическая активность NK-клеток [253].

Несмотря на эти данные, сигаретный дым может также оказывать стимулирующее действие на NK-клетки.Stolberg et al. показывают, что острое воздействие сигаретного дыма вызывает активацию NK-клеток. В частности, воздействие сигаретного дыма вызвало повышенное накопление примированных / активированных CD69 (+) NK-клеток в паренхиме и на слизистой оболочке дыхательных путей. Примирование и активация NK-клеток, как полагают, является результатом перекрестного взаимодействия между NK и сигнальными клетками, такими как DC, и CCR4, по-видимому, является возможным промотором взаимодействия NK / DC [254]. Кроме того, CSE регулирует уровень IL-33 эпителиального происхождения с реципрокным увеличением экспрессии рецептора IL-33 ST2 на макрофагах и NK-клетках.Это может значительно способствовать усилению провоспалительных реакций I типа в легких во время инфекции [255]. Кроме того, анализ данных на людях показал, что острое курение связано с системной активацией NK-клеток. Активация легочных NK-клеток зависела от совпадения ХОБЛ, независимо от текущего статуса курения [256].

Таким образом, влияние курения на выработку цитокинов и цитолитическую активность NK-клеток неоднозначно, и доказательства указывают как на провоспалительные, так и на противовоспалительные эффекты.Общий результат, вероятно, зависит от имеющихся сопутствующих заболеваний и общего состояния пациента.

4.1.5. Нейтрофилы

Нейтрофилы играют ключевую роль в патогенезе ХОБЛ. Однако в последнее время большое внимание уделяется нейтрофильному воспалению при астме [257]. Согласно эпидемиологическим и экспериментальным исследованиям, сигаретный дым является мощным индуктором нейтрофильного воспаления. Короче говоря, CSE приводит к некрозу бронхиальных эпителиальных клеток с реципрокным высвобождением DAMP и выработкой провоспалительных цитокинов, которые, в свою очередь, вызывают нейтрофильное воспаление дыхательных путей [146].Повышенное количество нейтрофилов в ЖБАЛ после КСЭ неоднократно демонстрировалось на людях и экспериментальных моделях [146, 258, 259]. У пациентов с астмой нейтрофильное воспаление дыхательных путей часто связано с тяжелым течением заболевания и плохой реакцией на терапию глюкокортикоидами. Курильщики-астматики имеют более высокую экспрессию IL-17A, IL-6 и IL-8, а также количество нейтрофилов в слизистой оболочке бронхов по сравнению с некурящими астматиками [260]. В дополнение к этому, костимуляция с помощью CSE, индуцированного дымом IL-17A и аэроаллергенов дополнительно увеличивает выработку IL-6 и IL-8, указывая на то, что индуцированное дымом нейтрофильное воспаление у астматиков может быть самоподдерживающимся по своей природе.

CSE также изменяет активацию нейтрофилов и хемотаксис, что может способствовать нарушению иммунных ответов, наблюдаемых у курильщиков. Существует некоторая дискуссия о том, может ли CSE запускать образование внеклеточных ловушек нейтрофилов (NET), которые имеют решающее значение для противомикробных реакций врожденной защиты хозяина. Воздействие сигаретного дыма могло вызвать НЕТоз нейтрофилов. Более того, было показано, что CSE-индуцированные NETs способны управлять созреванием и активацией плазматических дендритных клеток мышей с последующей поляризацией наивных CD4 + Т-клеток в сторону ответов Th2 и Th27 [237].Однако более недавнее исследование продемонстрировало, что высвобождение NETs было нарушено в нейтрофилах человека из периферической венозной крови здоровых добровольцев после непродолжительного лечения CSE или его компонентов или метаболитов. Кроме того, эти нейтрофилы проявляли пониженную скорость, скорость и направленность [261].

В заключение, большинство данных, по-видимому, предполагают, что воздействие сигаретного дыма связано с индукцией нейтрофильного воспаления, основным признаком которого является увеличение числа нейтрофилов.Однако это может изменить ответ на инфекционные агенты, причем исследования показывают как снижение, так и усиление хемотаксиса и активации после воздействия микробных продуктов.

4.2. Влияние воздействия сигаретного дыма на адаптивный иммунитет

В ответ на патогены врожденные иммунные реакции вызывают более сложный, патоген-специфический адаптивный иммунный ответ. В настоящее время хорошо известно, что сигаретный дым оказывает сильное влияние на активность и функцию адаптивных иммунных клеток, а именно Т-хелперных клеток (Th2, Th3, Th27), CD4 + CD25 + регуляторных Т-клеток, CD8 + Т-клеток, В-клеток и Т и памяти. В-лимфоциты.

4.2.1. Т-лимфоциты

Т-клетки играют центральную роль в клеточно-опосредованном адаптивном иммунитете. После распознавания антигена клетки врожденного иммунитета активируют и стимулируют дифференцировку наивных Т-клеток с последующим образованием преимущественно эффекторных Т-клеток и, в меньшей степени, Т-клеток памяти и регуляторных Т-клеток [262, 263, 264, 265, 266].

Воздействие сигаретного дыма приводит к значительным изменениям в распространенности определенных подтипов Т-клеток в крови и тканях. Было показано, что у активных курильщиков больше циркулирующих CD3 + T, CD4 + T и общего количества лимфоцитов, чем у некурящих [267].Соответственно, количество Т-клеток памяти и В-клеток памяти с переключением классов достоверно и положительно коррелировало с привычками к курению, указывая на то, что лимфоциты чувствительны к кумулятивному эффекту курения [267, 268]. Хотя активное курение оказывает положительное влияние на количество Т-лимфоцитов в памяти, это может быть неверно для пассивного курения. У некурящих подростков воздействие SHS коррелировало со снижением количества циркулирующих CD3 + и CD4 + Т-клеток памяти с обратным линейным увеличением процента наивных субпопуляций CD4 + CD45RA + и CD3 + CD45RA + Т-клеток [269].

Другие исследования продемонстрировали более высокое количество циркулирующих клеток Th27 и, хотя и не всегда, увеличение процента CD8 + Т-клеток у курильщиков или пациентов с ХОБЛ [270,271]. Варгас-Рохас и др. показал, что процент Th27-клеток в циркулирующих субпопуляциях Т-клеток от пациентов с ХОБЛ был выше, чем уровни Th27 в здоровой популяции [272]. Кроме того, мыши, подвергшиеся воздействию сигаретного дыма, имели более высокое количество IL-21 + Th27 и IL-21R + CD8 + Т-клеток в периферической крови. Однако влияние CSE на количество циркулирующих CD8 + Т-клеток неоднозначно.В отличие от предыдущего исследования Koch et al. показали, что у курильщиков с ХОБЛ циркулирует меньше CD8 + Т-клеток, чем у курильщиков без ХОБЛ и некурящих, и что эти клетки обладают пониженной хемотаксической активностью. Однако процент циркулирующих цитотоксических эффекторных CD8 + Т-лимфоцитов был повышен у курильщиков и пациентов с ХОБЛ по сравнению с некурящими [271].

Исследования, оценивающие состав Т-клеток в жидкости БАЛ, показали, что у курильщиков соотношение CD4 + / CD8 + снижено по сравнению с некурящими [273].Это изменение в субпопуляциях Т-лимфоцитов вызвано более высокой долей CD8 + Т-лимфоцитов в ЖБАЛ, что неоднократно обнаруживалось у курильщиков и пациентов с ХОБЛ [274, 275]. Кроме того, у курильщиков наблюдается более высокое соотношение подтипов Tc1 / Tc2 CD8 + Т-клеток в ЖБАЛ, связанное с повышенной продукцией IFN-γ [275]. CD8 + Т-клетки можно разделить на два подтипа — клетки Tc1, выделяющие IFN-γ, но не IL-4, и клетки Tc2, продуцирующие IL-4, но не IFN-γ. Несмотря на эти данные, хронический CSE был связан с повышенным количеством Th2 и Th27 клеток в ЖБАЛ [276].

Итак, курильщики сигарет имеют повышенное количество циркулирующих CD3 + T и CD4 + T-лимфоцитов, включая клетки Th27, тогда как точное влияние сигаретного дыма на количество CD8 + T-клеток в периферической крови остается неясным. CSE увеличивает количество клеток CD8 +, Th2 и Th27 в ЖБАЛ. Однако могут быть обнаружены некоторые расхождения в результатах между исследованиями, что дает некоторую неопределенность в отношении точных механизмов, управляющих рекрутированием клеток в различные среды дыхательных путей.

Клетки Th2 и Th3

Т-хелперы типа 1 (Th2) и лимфоциты Th3 представляют собой два подмножества CD4 + Т-клеток с реципрокными функциями и паттернами цитокинов. Клетки Th2 продуцируют гамма-интерферон, IL-2 и TNF-β, которые активируют макрофаги и отвечают за клеточный иммунитет и фагоцит-зависимые защитные реакции [277]. Клетки Th3 характеризуются выработкой ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10 и ИЛ-13, которые отвечают за усиленный синтез антител, активацию эозинофилов и ингибирование некоторых функций макрофагов, обеспечивая, таким образом, независимые от фагоцитов защитные ответы [277]. ].

Было показано, что постоянное воздействие сигаретного дыма изменяет баланс между Th2 и Th3 CD4 + Т-клетками в легких [278]. Хронический CSE был связан с повышенным количеством клеток Th2 и Th27 в ЖБАЛ, а также с усилением Th3-опосредованного воспаления дыхательных путей [16, 276]. Повышенный процент клеток Th2 и Th27 у курильщиков и пациентов с ХОБЛ может быть ответственным за поддержание хронического воспаления легких. С другой стороны, было показано, что CSE подавляет тип Th2 и способствует иммунным ответам типа Th3 [278].В то время как увеличение Th2 может увеличить риск развития эмфиземы, переход с Th2 на Th3 может способствовать развитию аллергических заболеваний, таких как астма. Соответственно, наша группа ранее продемонстрировала иммунный ответ, управляемый Th3, у детей-астматиков, подвергшихся воздействию табачного дыма родителей [279]. Shaler et al. показали, что постоянное воздействие сигаретного дыма препятствует защитному иммунитету против микобактерий 1-го типа на мышах с туберкулезом легких. Механически CSE значительно нарушает отложение в легких антигенпрезентирующих клеток и продукцию ими IFN-γ, TNF-α, IL-12 и RANTES, таким образом подавляя рекрутирование Th2-поляризованных клеток в легкие.Одновременно CSE усиливал ответы Th3 CD4 + IL-4 + в легких, предполагая, что он может инициировать специфические изменения поляризации Т-клеток при попадании в легкие. В соответствии со значительным снижением продукции цитокинов Th2, постоянное воздействие сигаретного дыма существенно подавляло способность мононуклеарных клеток легких продуцировать оксид азота, тем самым уменьшая количество бактерицидных продуктов в легких и ослабляя антибактериальные защитные реакции хозяина. Это очень важно, поскольку сильно ослабленный иммунитет Th2 в легких, вызванный воздействием табачного дыма, предрасполагает к хронической бактериальной колонизации и инфекции, что подтверждается ослаблением контроля микобактерий.

В поддержку предположения о том, что CSE может смещать местные иммунные ответы легких на иммунитет Th3, пришли наблюдения, полученные на экспериментальных моделях астмы. По-видимому, одновременное введение сигаретного дыма и яичного альбумина вызывает развитие воспаления дыхательных путей с преобладающим иммунным ответом Th3-типа и, кроме того, связано с замедленной толерантностью к ингаляционному антигену [16]. Этот сдвиг в сторону Th3 иммунитета запускается множеством медиаторов, включая липокортин 1 и вышеупомянутый TSLP [142].Липокортин 1 — это естественный фактор защиты от воспаления, способный регулировать Т-хелперные реакции. Bhalla et al. наблюдали, что нарушение синтеза и деградации липокортина 1 может двунаправленно влиять на иммунные ответы у животных, подвергшихся воздействию табачного дыма, либо путем увеличения ответа Th2 Т-хелперных клеток, либо путем сдвига ответа Th2 на ответ Th3 [280].

В совокупности, несмотря на убедительные доказательства того, что CSE усиливает иммунные ответы Th2, которые имеют большое значение в патогенезе и прогрессировании ХОБЛ, существуют данные о вкладе CSE в смещение Th3 иммунитета легких, имеющее решающее значение для аллергической сенсибилизации и астмы.

Клетки Th27

Клетки Т-хелперов 17 (Th27) представляют собой подмножество провоспалительных Т-клеток, определяемых по выработке ими интерлейкина 17 (ИЛ-17) [281]. IL-17A представляет собой провоспалительный цитокин, преимущественно высвобождаемый из клеток Th27. Это хорошо известный регулятор клеточного иммунитета, поскольку он способен стимулировать экспрессию вторичных провоспалительных хемокинов и факторов роста в эпителиальных и мезенхимальных клетках и, таким образом, опосредовать рекрутинг и активацию нейтрофилов, а также накопление нейтрофилов и макрофагов. в легочной ткани [282].Следует отметить, что IL-17A участвует в патогенезе астмы [283]. Экспрессия IL-17A повышена в эозинофилах крови, мокроте и образцах бронхоальвеолярного лаважа пациентов с астмой по сравнению с контрольными субъектами [284]. Во время аллерген-индуцированного воспаления дыхательных путей IL-17A запускает рекрутмент альвеолярных макрофагов и нейтрофилов и регулирует гиперреактивность дыхательных путей к метахолину [283,285]. Более того, IL-17, по-видимому, играет решающую роль в активации Т-клеток в аллерген-специфических иммунных ответах, поскольку мыши с дефицитом IL-17 показали ослабленную Т-зависимую продукцию антител, а также реакции контактной, замедленной реакции и реакции гиперчувствительности дыхательных путей. [285].

Данные исследований на людях и экспериментальных исследований убедительно свидетельствуют о том, что CSE увеличивает количество клеток Th27 в легочной ткани и периферической крови [270, 272, 286]. Более высокое количество клеток Th27 было связано с повышенной экспрессией IL-17 и IL-21, что объясняет повышенную регуляцию продукции перфорина и гранзима B в увеличенном количестве CD8 + Т-клеток. В целом, клетки Th27 отрицательно коррелируют с Т-регуляторными клетками, а сигналы, которые заставляют Th27 дифференцироваться, ингибируют дифференцировку Treg [281].Следовательно, эти результаты могут означать, что цитотоксическая функция CD8 + Т-клеток может регулироваться клетками Th27 [270]. Соответственно, у мышей с ХОБЛ, вызванной постоянным табачным дымом, наблюдался повышенный уровень субпопуляции Th27 с последующей активацией Th27-ряда цитокинов (IL-6, IL-17A и IL-23) как в легочной ткани, так и в периферической крови [286]. . Более того, CSE-индуцированные ответы Th27 в значительной степени вовлечены в индукцию нескольких аутоиммунных заболеваний, таких как ХОБЛ, псориаз и ревматоидный артрит [287].

В заключение, результаты исследований как на животных, так и на людях подчеркивают тот факт, что клетки Th27 способствуют усилению вызванного курением воспаления и связаны с аутоиммунными ответами.

Treg-клетки

Регуляторные Т-клетки представляют собой субпопуляцию Т-клеток, которые модулируют иммунную систему, поддерживают толерантность к аутоантигенам и предотвращают аутоиммунные заболевания. Tregs являются иммунодепрессивными и обычно подавляют или подавляют индукцию и пролиферацию эффекторных Т-клеток [288].Многие исследования показали, что воздействие табачного дыма приводит к дисбалансу Treg. Исследование фенотипических паттернов Т-лимфоцитов при ХОБЛ показало значительное подавление активности CD4 + CD25 + Treg-клеток в ЖБАЛ у пациентов с ХОБЛ по сравнению со здоровыми курильщиками [289]. Напротив, многие исследования показали повышенный уровень Treg-клеток среди пациентов с ХОБЛ. Пациенты с диагностированной ХОБЛ, оставшиеся курильщиками, имели значительно повышенный уровень CD4 + CD25 + Treg по сравнению со здоровыми некурящими [290].Исследование Hou et al. продемонстрировали несбалансированное воздействие табачного дыма на Treg-клетки [291]. В частности, у пациентов с ХОБЛ было пониженное количество супрессивных Treg (CD25 ++ CD45RA + Treg в состоянии покоя и CD25 +++ CD45RA- активированные Treg), но более высокий процент клеток FrIII по сравнению с курильщиками, не курящими ХОБЛ, что может означать дисбаланс Treg (aTreg + rTreg по сравнению с Fr III) оказывает влияние на патогенез ХОБЛ.

4.2.2. B-лимфоциты

B-клетки играют важную роль в качестве компонента адаптивной иммунной системы.Они отвечают за секретирование антител и цитокинов и участвуют в процессе презентации антигена. Неопровержимые данные исследований на людях и экспериментальных исследований показывают, что курение сигарет может быть связано с подавлением развития, функции и выработки иммуноглобулинов В-клеток [292, 293]. Кроме того, в последнее время значительное внимание привлекли вызванные сигаретным дымом изменения в распределении В-клеток и лежащие в их основе механизмы. У пациентов с ХОБЛ было обнаружено повышенное количество В-клеток в мелких дыхательных путях [294].Более недавнее исследование продемонстрировало более низкое (запоминающее) количество B-клеток с одновременным увеличением количества Treg в периферической крови пациентов с ХОБЛ по сравнению со здоровым контролем [292]. В то время как процентное содержание В-клеток памяти в периферической крови было значительно снижено, у нынешних курильщиков наблюдался более высокий процент В-клеток памяти с переключением классов, чем у некурящих, независимо от состояния болезни. Поскольку процесс рекомбинации с переключением класса является результатом повторного распознавания антигена, это открытие предполагает, что сигаретный дым потенциально способен генерировать неоантигены, происходящие из поврежденной ткани легких или компонентов дыма в хронической форме.

В соответствии с вышеупомянутыми открытиями относительно более низкого процента В-клеток в крови, воздействие сигаретного дыма может подавлять процесс дифференцировки В-клеток на очень ранней стадии, поскольку в костный мозг мышей [295 296].

Другие вредные эффекты воздействия сигаретного дыма включают подавление выработки иммуноглобулинов. Хотя секреция IgA, IgG и IgM, по-видимому, снижается в периферической крови и слюне курильщиков, этот подавляющий эффект не влияет на синтез IgE [297].Действительно, у курильщиков повышен уровень циркулирующего IgE, что потенциально может объяснить повышенный риск развития атопии и астмы [108, 297]. Исследование, проведенное в 1983 году, предоставило доказательства того, что средний уровень IgE у бывших курильщиков был намного ниже, чем у тех, кто в настоящее время заядлых курильщиков, но все же был выше, чем у некурящих [298].

В целом курение сигарет увеличивает отложение B-клеток в дыхательных путях, снижает частоту B-клеток памяти в периферической крови, снижает секрецию IgA, IgG и IgM, но увеличивает выработку IgE, что может способствовать развитию аллергических заболеваний.Негативное влияние CSE на B-клетки можно выявить на очень ранней стадии процесса дифференцировки, примером чего является подавление пре-B-клеток и про-B-клеток костного мозга у мышей.

Дым электронных сигарет вызывает аденокарциному легких и уротелиальную гиперплазию мочевого пузыря у мышей

Значение

Дым электронных сигарет (ECS) предназначен для доставки никотина, и его использование становится все более популярным. Ранее мы обнаружили, что ECS вызывает повреждение ДНК и ингибирует восстановление ДНК в легких и уротелии мочевого пузыря мыши.Никотин индуцирует те же типы аддуктов ДНК и оказывает аналогичное влияние на ингибирование репарации ДНК в клетках человека. Никотин также увеличивает восприимчивость к мутациям и канцерогенным трансформациям человеческих клеток. Наши текущие результаты показывают, что у мышей, подвергшихся воздействию ECS, развилась аденокарцинома легких и уротелиальная гиперплазия мочевого пузыря, что указывает на то, что ECS является канцерогеном легких и потенциальным канцерогеном мочевого пузыря у мышей. Хотя хорошо известно, что табачный дым представляет огромную угрозу для здоровья человека, угроза, которую ECS представляет для людей, еще не известна и требует тщательного изучения.

Abstract

Электронные сигареты (E-cigs) продаются как безопасная альтернатива табаку для доставки стимулирующего никотина, и их использование становится все более популярным, особенно среди молодого населения. Недавно мы показали, что у мышей, подвергшихся краткосрочному (12 недель) курению электронных сигарет (ECS), наблюдались обширные повреждения ДНК в легких, сердце и слизистой оболочке мочевого пузыря, а также снижение восстановления ДНК в легких. Никотин и продукт его нитрозирования, нитрозаминкетон, полученный из никотина, вызывают такие же вредные эффекты в эпителиальных клетках легких и уротелия мочевого пузыря человека.Эти результаты позволяют предположить, что ЭКС является канцерогеном для легких и мочевого пузыря в дополнение к никотину. Учитывая тот факт, что использование электронных сигарет стало популярным в последнее десятилетие, эпидемиологические данные о взаимосвязи между ЭКС и раком человека могут быть неизвестны в ближайшее десятилетие. В этом исследовании канцерогенность ECS была проверена на мышах. Мы обнаружили, что у мышей, подвергшихся воздействию ECS в течение 54 недель, развились аденокарциномы легких (9 из 40 мышей, 22,5%) и уротелиальная гиперплазия мочевого пузыря (23 из 40 мышей, 57,5%). Эти поражения были чрезвычайно редки у мышей, подвергавшихся воздействию контрольного транспортного средства или фильтрованного воздуха.Текущие наблюдения о том, что ECS вызывает аденокарциномы легких и уротелиальную гиперплазию мочевого пузыря, в сочетании с нашими предыдущими выводами о том, что ECS вызывает повреждение ДНК в легких и мочевом пузыре и ингибирует восстановление ДНК в тканях легких, предполагают, что ECS является канцерогеном легких и потенциального мочевого пузыря у мышей. Хотя хорошо известно, что табачный дым представляет огромную угрозу для здоровья человека, представляет ли ECS какую-либо угрозу для человека, пока не известно и требует тщательного расследования.

Табачный дым (TS) — это традиционный способ доставки никотина, который является мощным стимулятором центральной нервной системы, доставляющим курильщикам мгновенное удовольствие и приводящим к длительной толерантности и зависимости (1).К сожалению, помимо никотина, TS содержит множество канцерогенов, образующихся при сушке и сжигании табака (2, 3). В течение последних нескольких десятилетий TS была ведущей причиной рака человека (4). Фактически, до 85% случаев рака легких и 50% рака мочевого пузыря могут быть связаны с TS (4). Электронные сигареты (E-cigs) — это изобретение, предназначенное для доставки никотина в аэрозолях посредством контролируемого нагревания органического раствора, содержащего никотин (5). Этот процесс позволяет избежать появления табачных листьев и горения и генерировать только аэрозоли, состоящие из никотина и относительно безвредных растворителей изопропиленгликоля и растительного глицерина.Из-за этого электронные сигареты рекламируются как обеспечивающие «кайф» TS без известных побочных эффектов, и электронные сигареты были приняты в качестве безопасной замены обычных сигарет. Электронные сигареты широко используются в качестве шлюза для прекращения TS и даже применяются в качестве терапевтической альтернативы для уменьшения респираторных заболеваний, связанных с TS (5, 6).

Хорошо известно, что во время сушки и сжигания табака никотин может превращаться в нитрозамины посредством нитрозирования, и что многие из этих нитрозаминов, такие как никотиновый нитрозаминкетон (NNK) и нитрозонорникотин (NNN), являются сильнодействующими человеческими свойствами. и канцерогены животных (2, 3, 7).Следовательно, измерение уровней нитрозаминов в жидкостях организма стало золотым стандартом для оценки потенциального канцерогенного действия TS (7, 8). Этот метод был адаптирован для устранения потенциальных канцерогенных эффектов дыма электронных сигарет (ECS) (9). Было обнаружено, что уровень 4- (метилнитрозоамино) -4- (3-пиидил) -1-бутанола (NNAL), производного NNK, в моче и слюне курильщиков электронных сигарет составляет всего 5% от уровней. обнаруживается у сопоставимых курильщиков табака (9). Это привело к предположению, что нитрозирование никотина не происходит в ECS и что только небольшое количество нитрозаминов присутствует в ECS (9).Этот вывод подтвердил рекомендацию экспертов общественного здравоохранения, в том числе Министерства здравоохранения Англии, о том, что электронные сигареты на 95% безопаснее обычных сигарет (10), и побудил многих эпидемиологов предположить, что переход с TS на ECS может спасти миллионы жизней ( 11).

Вероятно, в результате этого рассуждения популярность курения электронных сигарет быстро растет. В настоящее время 3,2% взрослых в Соединенных Штатах и ​​3,6 миллиона учащихся младших и старших классов приобщились к курению электронных сигарет (10).Учитывая широкое использование электронных сигарет, их влияние на здоровье — особенно канцерогенность — заслуживает тщательного изучения (10). При оценке безопасности электронных сигарет необходимо изучить 3 критических вопроса. Во-первых, является ли уровень нитрозаминов в моче, слюне или крови курильщиков электронных сигарет показателем канцерогенного воздействия ЭКС? Во-вторых, хотя установлено, что TS содержит значительные количества нитрозаминов от нитрозирования никотина во время сушки и сжигания табака, неизвестно, может ли никотин, вдыхаемый в ECS, нитрозироваться и превращаться в нитрозамины.В свете данных о том, что в клетках человека имеется достаточное количество ферментов цитохрома p450, которые способны быстро метаболизировать нитрозамины в продукты, повреждающие ДНК (7, 8), мы сталкиваемся с третьим и наиболее важным вопросом: может ли уровень нитрозамина в моче? слюна и кровь представляют степень нитрозирования вдыхаемого никотина ECS in vivo?

Эти вопросы привели нас к оценке эффектов ECS и никотина путем определения повреждений ДНК, вызванных ECS в различных органах, а не измерения NNK, NNN и NNAL в крови и моче модели мышей (12).Ранее мы наблюдали, что ECS индуцирует мутагенные аддукты ДНК (циклический 1, N 2 -γ-гидроксипропано-дезоксигуанозин [γ-OH-PdG] и O 6 -метил-dG) в легких, сердце, и слизистая оболочка мочевого пузыря и ингибирует репарацию ДНК в легких на мышиной модели (12). Мы также обнаружили, что никотин и NNK индуцируют одни и те же аддукты ДНК, нарушают функции репарации ДНК и повышают чувствительность к мутационным и канцерогенным трансформациям в эпителиальных клетках легких и мочевого пузыря человека (12).Основываясь на этих наблюдениях, мы предполагаем, что ЭКС, как и никотин, могут вызывать рак легких и мочевого пузыря (12). В этом исследовании мы изучили онкогенность ECS у мышей.

Методы

Экспозиция ECS.

Всего 85 самцов мышей FVB / N (возраст от 6 до 8 недель; лаборатория Джексона) были случайным образом разделены на 3 группы. Одна группа ( n = 45) подверглась воздействию ECS, созданного из электронного сока (никотин [36 мг / мл], растворенный в носителе [Veh; изополипропиленгликоль и растительный глицерин в соотношении 1: 1]).Мы поддерживали концентрацию твердых частиц в камере на уровне 130 мг / м 3 и концентрацию никотина в аэрозоле на уровне 0,196 мг / м 3 ( SI Приложение , таблица S1). Вторая группа ( n = 20) подвергалась воздействию Veh. Аэрозоли для обеих групп генерировались с помощью автоматического 3-портового генератора аэрозолей для электронных сигарет (e∼Aerosols), настроенного на постоянное напряжение (1,9 А, 4,0 В) ( SI Приложение , Таблица S1), как это сделано в коммерческие электронные сигареты (12, 13). Мышей подвергали воздействию на все тело.Условия воздействия были такими же, как описано ранее (12). Мышей подвергали воздействию в течение 4 часов в день и 5 дней в неделю в течение 54 недель. Третья группа ( n = 20) оставалась в помещении для животных, подвергаясь воздействию окружающего фильтрованного воздуха (FA). В течение 54-недельного периода 3 мыши ECS были найдены мертвыми, а 2 мыши ECS пришлось убить из-за бездействия. У этих 5 мышей опухоли легких не наблюдали, и у 1 был обнаружен полип толстой кишки. Одна мышь, подвергшаяся воздействию Вех, была найдена мертвой, а одна погибла из-за парализованной ноги.Две мыши, подвергшиеся воздействию FA, также были найдены мертвыми. У этих 2 мышей Veh и 2 мышей FA не наблюдали опухоли легких. В конце 54-недельного воздействия выжили 40 мышей, подвергшихся воздействию ECS, 18 мышей, подвергшихся воздействию Veh, и 18 мышей, подвергшихся воздействию FA. Средняя масса тела в этих 3 группах была схожей (группа FA, 34,4 ± 5,84 г; группа Veh, 34,0 ± 2,78 г; и группа ECS, 35,1 ± 2,99 г; ECS vs. FA, P = 0,67; ECS vs. Veh, P = 0,1998), и все мыши выглядели здоровыми. Этих мышей умерщвляли, чтобы исследовать образование опухолей в различных органах.

Гистопатология.

Мышей умерщвляли по истечении 54 недель воздействия в соответствии с протоколами IA17-00048 и 170313-01 Комитета институционального ухода за животными Нью-Йоркского университета и их использования. Легкие, сердце, печень, почки, кишечник, поджелудочная железа, мозг, селезенка и мочевой пузырь были взяты и исследованы невооруженным глазом на образование опухолей. Все органы немедленно фиксировали и хранили в 10% растворе формалина до подготовки срезов. Срезы образцов легких и мочевого пузыря были подготовлены и окрашены гематоксилином и эозином (H & E) в центре гистологии Медицинского центра Лангоне Нью-Йоркского университета.В дополнение к окрашиванию H&E слайды ткани мочевого пузыря окрашивали антителами к маркерам пролиферации MCM-2 и PCNA и маркеру базальных клеток KRT5 в центре гистологии урологии Нью-Йоркского университета. Все слайды независимо исследовали 3 патологоанатома.

Статистический анализ.

GraphPad Prism 7.0 и односторонний дисперсионный анализ с наименьшей значимой разницей (LSD) post hoc-тест были использованы для статистического анализа образования аденокарциномы легкого и гиперплазии уротелия мочевого пузыря, соответственно, в 3 группах (ECS, Veh и FA). мышей.

Результаты

ECS вызывает аденокарциному легких.

Поскольку курильщикам табака требуется более двух десятилетий для развития рака легких и мочевого пузыря, а также поскольку TS также связана с другими видами рака человека, мы исследовали образование опухолей в различных органах после 54 недель воздействия (4, 14, 15). Исследование анатомии мышей выявило опухолевидный рост в коже, брюшной полости, кишечнике и легких. Сводная информация об образовании опухолей, наблюдаемых у всех экспериментальных мышей, представлена ​​в таблице 1.Эти опухолевидные ткани дополнительно исследовали под микроскопом. Результаты показывают, что у 9 из 40 (22,5%) мышей, подвергшихся воздействию ECS, развились опухоли легких. Все опухоли легких, подвергнутые гистологическому исследованию 3 патологами, были идентифицированы как аденокарциномы (рис. 1). Из этих 9 мышей с опухолями легких у 8 была единственная аденокарцинома легкого, а у 1 образовались множественные ипсилатеральные аденокарциномы легкого (рис. 1). Ни у одной из мышей, подвергшихся воздействию Veh, не развились опухоли легких. Только у 1 из 18 (5,6%) мышей, подвергшихся воздействию FA, в легком образовалась 1 аденокарцинома.Статистический анализ возникновения аденокарциномы легких у мышей, подвергшихся воздействию ECS, Veh и FA, представлен в таблицах 2 и 3 и в приложении SI , таблице S2 A — E . Результаты показывают, что более высокая частота аденокарциномы легких у мышей, подвергшихся воздействию ECS, по сравнению с мышами, подвергавшимися воздействию Veh ( P = 0,0454), по сравнению с комбинацией мышей, подвергнутых воздействию Veh и FA ( P = 0,0154), и по сравнению с мышами, подвергнутыми воздействию Veh и Мыши, подвергшиеся воздействию FA ( P = 0,0352), являются статистически значимыми.

Таблица 1.

Опухолевый рост, обнаруженный в различных органах мышей, подвергшихся воздействию FA, Veh и ECS *

Рис. 1. Воздействие

ECS индуцирует образование опухоли легких у мышей. Мышей подвергали воздействию FA ( n = 20) и аэрозолей, генерируемых Veh (изопропиленгликоль и растительный глицерин в соотношении 1: 1, n = 20) и ECS (36 мг / мл никотина в Veh, n . = 45) в течение 4 часов в день и 5 дней в неделю в течение 54 недель, как описано в основном тексте. Выжившие мыши в конце воздействия следующие: подвергнутые воздействию FA ( n = 18), подвергнутые Veh ( n = 18) и подвергнутые ECS ( n = 40).Все мыши, умершие до 54-недельного времени воздействия, не имели опухолей легких. ( A ) Ткани опухоли легкого. Макроанатомические фотографии ( слева ) тканей аденокарциномы легкого, вызванной ECS (28-2, 28-4, 30-1, 30-2, 36-1, 38-2, 39-2, 39-5, 40- 2) и аденокарцинома легкого от мыши, подвергшейся воздействию FA (101-1), а также представлены гистологические слайды окрашивания H и E этих аденокарцином легкого ( Center и Right , увеличение 100 × и 400 × соответственно). . ( B ) Нормальная легочная ткань ( Левый , увеличение 100 ×; Правый , увеличение 400 ×).Примечания: (1) Воздействие Veh не вызывает опухоли легких. (2) Показана только общая анатомическая фотография опухоли легкого мыши 28-2, подвергшейся воздействию ECS.

Таблица 2.

Заболеваемость аденокарциномой легких у мышей, подвергшихся воздействию ECS, Veh и FA

Таблица 3.

Статистический анализ заболеваемости аденокарциномой легких у мышей, подвергшихся воздействию ECS, Veh и FA *

ECS вызывает уротелиал мочевого пузыря Гиперплазия.

Хотя в мочевом пузыре ни в одной из экспериментальных групп не было обнаружено видимых опухолей, при гистологическом исследовании у мышей, подвергшихся воздействию ЭКС, были очевидны гиперпластические изменения уротелия мочевого пузыря (рис.2). Эти поражения представляли собой простую или узловую гиперплазию, характеризовавшуюся значительным увеличением уротелиальных слоев (от 5 до 8 слоев по сравнению с 3 слоями в контрольных группах), увеличением Krt5-положительных базальных уротелиальных клеток и отчетливым повышением маркеров пролиферации клеток. MCM-2 и PCNA (16, 17). В целом, у 23 из 40 (57,5%) мышей, подвергшихся воздействию ECS, у 1 из 16 (6,3%) мышей, подвергшихся воздействию Veh, и ни у одной из 17 (0%) мышей, подвергшихся воздействию FA, развилась уротелиальная гиперплазия ( P <0,001) (рис. . 2).Примечательно, что частота уротелиальной гиперплазии немного выше у мышей с опухолями легких (6 из 9, 67%), чем у мышей без опухолей легких (18 из 31, 58%), хотя разница не является статистически значимой ( P = 0,64).

Рис. 2. Воздействие

ECS вызывает у мышей уротелиальную гиперплазию мочевого пузыря. Ткани мочевого пузыря собирали у тех же мышей, подвергшихся воздействию ECS, Veh и FA в течение 54 недель, как показано на рис. 1. Срезы тканей были подготовлены для гистологического исследования и окрашены H и E или антителами к маркерам пролиферации MCM-2 и PCNA. и маркер базальных клеток KRT5 (увеличение 200 ×).( A ) Типичный результат окрашивания тканей мочевого пузыря мышей, подвергшихся воздействию FA, Veh и ECS. ( B ) Представление гистограммы уротелиальной гиперплазии мочевого пузыря у мышей, подвергшихся воздействию FA ( n = 17), Veh ( n = 16) и ECS ( n = 40). Примечания: (1) Хотя мы смогли исследовать образцы ткани мочевого пузыря от всех 40 мышей, подвергшихся воздействию ECS, во время подготовки образцов 1 мочевой пузырь от мышей, подвергшихся воздействию FA, и 2 пузыря от мышей, подвергшихся воздействию Veh, были случайно разрушены. (2) Простая (мышь ECS1) и узловая (мышь ECS2) гиперплазия имела заметно утолщенные уротелиальные слои и сильную экспрессию MCM-2, PCNA и KRT5 (последний указывает на рост базальных клеток) по сравнению с FA- и VEH. -экспрессированных мышей, у которых были очень тонкие уротелиальные слои с низкой экспрессией маркеров пролиферации.

Обсуждение

Канцерогенность никотина на животных моделях была спорной из-за большого количества противоречивых результатов (18–20). В то время как различные типы опухолей, включая лейомиосаркому, наблюдались у животных, получавших никотин через питьевую воду и подкожные инъекции (19, 20), многие из этих результатов подвергались критике за их экспериментальные недостатки и считались неадекватными доказательствами связи между воздействием никотина. и его влияние на канцерогенез (19).С другой стороны, крысы, подвергавшиеся воздействию никотина, испаренного струей воздуха, посредством ингаляции в течение 2 лет, не показали значительного различного опухолевого образования, включая опухоли легких (21). Тем не менее, это конкретное исследование также подверглось критике за отсутствие необходимых биологических анализов и небольшое количество экспериментальных животных (22 подвергнутых воздействию против 6 контрольных) (19). Несмотря на все эти неубедительные результаты, преобладает мнение, что никотин не канцерогенный (18). В отличие от результатов, показывающих, что никотин, испаренный струей воздуха, не является канцерогенным для легких у крыс (21), наши результаты показали, что никотин E-cig вызывает аденокарциному легких у мышей.Источники этого расхождения неясны. Было обнаружено, что размер аэрозоля ECS меньше, чем размер аэрозолей, генерируемых в TS (22). Вероятно, что небольшой размер аэрозоля электронных сигарет позволяет содержащемуся в нем никотину ECS глубоко проникать в ткани легких, вызывая повреждение ДНК в бронхиолоальвеолярных клетках, тогда как пары воздушного потока в основном откладываются в верхних аэродинамических подкладках и тканях, которые являются богат антиоксидантами, такими как глутатион, глутатионпероксидаза и супероксиддисмутаза, и может эффективно нейтрализовать метаболиты нитрозаминов.

Мы считаем, что наши результаты подтверждают вывод о том, что γ-OH-PdG и O 6 -метил-dG, повреждение ДНК, вызванное метаболитами продуктов нитрозирования никотина, вероятно, являются основными причинами канцерогенеза легких, а также мочевого пузыря в мыши (12, 23, 24). Хотя рак мочевого пузыря / уротелиальная карцинома не наблюдались, у некоторых мышей, подвергшихся воздействию ECS, наблюдалась плоская и / или папиллярная гиперплазия уротелия с повышенной митотической активностью ( SI Приложение , рис. S1).Следует отметить, что мы обнаружили, что уровни ECS-индуцированного γ-OH-PdG и O 6 -метил-dG в слизистой оболочке мочевого пузыря составляли только одну четвертую и одну пятую от количества, обнаруженного в тканях легких, соответственно. у мышей (12). Эти результаты повышают вероятность того, что требуется более длительное воздействие и / или более высокие дозы ECS для того, чтобы слизистая оболочка мочевого пузыря накапливала достаточный уровень γ-OH-PdG– и O 6 -метил-dG-индуцированных мутаций, которые могли запускают онкогенез мочевого пузыря по сравнению с канцерогенезом легких.Ранее мы наблюдали, что мыши с повышенной восприимчивостью к ECS-индуцированному образованию аддуктов ДНК в легких также более восприимчивы к ECS-индуцированному повреждению ДНК в мочевом пузыре (12). В настоящем исследовании мыши, более восприимчивые к индуцированному ECS онкогенезу легких, не были более склонны к развитию уротелиальной гиперплазии, что позволяет предположить, что индуцированный ECS туморогенез легких и уротелиальная гиперплазия являются разными явлениями.

Таким образом, мы показали, что воздействие ЭКС на мышей вызывает рак легких и уротелиальную гиперплазию мочевого пузыря.Эти наблюдения в сочетании с нашими предыдущими выводами (12) о том, что ECS индуцирует аддукты γ-OH-PdG и O 6 -метил-dG в уротелии легких и мочевого пузыря и ингибирует репарацию ДНК в тканях легких у мышей, и что никотин и NNK индуцируют те же типы аддуктов ДНК и эффект ингибирования репарации ДНК и повышают чувствительность к мутационным и канцерогенным трансформациям эпителиальных и уротелиальных клеток легких человека, что указывает на то, что ECS, а также никотин и NNK являются канцерогеном легких и потенциальным канцерогеном мочевого пузыря в мышей.Следует отметить, что TS является наиболее опасным агентом окружающей среды, которому обычно подвергаются люди, и что ECS может представлять или не представлять какую-либо опасность для человека. Общественность не должна приравнивать риск ECS к риску TS. Наши данные просто предполагают на основе экспериментальных данных в модельных системах, что этот вопрос требует более глубокого изучения в будущем.

Благодарности

Мы благодарим K. Galdane, E. Halzack, A. Chu, M.-w. Weng и S.H. Park за техническую помощь, а также докторов. Дж.Гольдберг, Ж.-С. Хван и М.-в. Венга за статистический анализ. Исследование было поддержано грантами NIH, RO11

, 1PO1CA165980, P30CA16087 и ES00260.

Сноски

  • Вклад авторов: M.-s.T., X.-R.W., L.-C.C., W.C.H. и H.L. разработали исследования; M.-s.T., H.-W.L., Y.X., F.-M.D. и A.L.M. проведенное исследование; M.-s.T. и Y.X. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; M.-s.T., X.-R.W., H.-W.L., Y.X., F.-M.D., A.L.M., L.-C.C., W.C.H. и H.L. проанализировали данные; И м.-s.T., X.-R.W., H.-W.L., Y.X., F.-M.D., A.L.M., L.-C.C., W.C.H. и H.L. написали статью.

  • Авторы заявляют об отсутствии конкурирующей заинтересованности.

  • Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.

  • Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1911321116/-/DCSupplemental.

  • Авторские права © 2019 Автор (ы). Опубликовано PNAS.

Связь статуса курения с инфекцией SARS-CoV-2, госпитализацией и смертностью от COVID-19: живой экспресс-обзор доказательств — статья (препринт v2)

{{PublicationType | capitalize}} рейтинг

Артикул

.

Qeios ID: {{публикации.qeios_id}}

Открытый доступ

CC BY

Авторские права: © {{PublicationYear}} {{publishing.presentation_authors [0] .full_name + (publishing.presentation_authors.length> 1? ‘Et al’: »)}}. Это публикация в открытом доступе, распространяемая на условиях CC BY 4.0 Лицензия, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Lic. Информация

Проверьте {{PublicationType | capitalize}} Источник информации об авторских правах и лицензии.

Декларации

Эксклюзивный обзор lil SOLID — младшего брата IQOS из Южной Кореи

Приветствую! Вы, наверное, уже заметили, что нас очень интересуют альтернативы традиционному курению.Все больше и больше наших читателей и зрителей интересуются этими устройствами. Сегодняшний обзор весьма необычен: он называется « lil SOLID система нагревания табака».

Что такое lil SOLID?

Что такого необычного, спросите вы? Это южнокорейское устройство производства KT&G, но продается под брендом IQOS.

Сначала не понял в чем подвох. Оказывается, в начале года Philip Morris (компания, стоящая за IQOS) подписала партнерское соглашение с корейской KT&G.Это позволяет им продавать устройство во многих странах под торговой маркой lil Solid, представленной IQOS. Такой вот симбиоз компаний и технологий!

Новость действительно интересная. Это означает, что рынок систем нагревания табака станет еще более насыщенным. Два-три года назад здесь правил только IQOS, потом появились glo и jouz. И теперь в бой вступает другой бренд.

Мне удалось достать именно этот экземпляр прямо из Кореи. В те времена это можно было даже назвать контрабандой.

Дизайн, материалы, качество сборки

Так что это за зверь? Это система нагрева табака. Он работает по принципу, аналогичному 2 другим известным системам нагрева табака, а именно IQOS и glo. Но дизайн — это своего рода смешанный мешок.

По дизайну лил больше похож на glo nano, только немного увеличен в высоту. Но с технологической точки зрения это скорее клон IQOS. Теперь в glo табак нагревается по периметру через слой бумаги, а в IQOS используется нагревательное лезвие.У Lil также есть нагреватель, который проникает в табачную палочку и нагревает ее изнутри. Только лезвие круглое, скорее как спица.

И это очень круто, потому что нагревательное лезвие IQOS сделано из керамики, а это довольно хрупкий элемент, который легко сломать. А в лиле утеплитель металлический и более надежный.

Корпус выполнен из пластика с металлизированным покрытием soft-touch. Приятна на ощупь, хорошо лежит в руке. Сверху металлическая вставка и круглая заглушка.Переместите его, и вы сможете вставить палку.

Lil Solid управляется одной кнопкой со световым индикатором.

Порт зарядки находится снизу, к сожалению microUSB, а не Type-C.

Верхняя часть устройства съемная, также можно снять крышку камеры нагрева для очистки устройства.

палочки твердые

Стики с разными вкусами я видел только на картинках, и выглядят они соблазнительно — табачные, ягодные и цитрусовые.Но опробовать их пока не удалось. У меня есть только пачка Fiit из Кореи, но в ней чисто табачный привкус. Поэтому вопрос о вкусах пока остается открытым.

Использование lil SOLID

Lil простой. Отодвиньте вилку, вставьте палку до упора, нажмите и удерживайте кнопку. Устройство завибрирует и начнет нагреваться. Индикатор мигает бирюзовым цветом.

Когда гаджет снова завибрирует, индикатор перестанет мигать, и тогда вы сможете набрать аэрозоль.Сеанс длится 14 затяжек. По окончании устройство завибрирует, и индикатор снова начнет мигать.

Когда заряд кончился, палочку нужно прокрутить 3 раза в одну сторону, и только после этого ее нужно вытащить, чтобы табак не выпал из палки и не застрял внутри.

Вторую палку можно использовать сразу. Устройство не требует пауз и подзарядки.

Главный вопрос, будет ли эта штука работать с флешками IQOS HEETS? В конце концов, это возможно.Клоны Jouz и китайские IQOS полностью совместимы со стиками HEETS.

Возьмем палочки от IQOS и сравним их с палочками от lil. Они одинаковы по диаметру. В продольном направлении палочки из лила немного длиннее. Но по идее они должны быть совместимы. Хорошо, давай попробуем.

Вставим флешку HEETS, ааа и… все нормально. Более чем хорошо! Было бы здорово, если бы все системы нагрева табака были совместимы с разными марками стиков.

Вердикт

В целом аппарат отличный. Конкуренция всегда укрепляет рынок и помогает нам, потребителям. Я не думаю, что выход Lil на рынок сильно повлияет на популярность IQOS, поскольку они серьезно отличаются по своей концепции.

Скорее, Lil может понравиться тем, кто сейчас использует jouz и glo. Есть несколько преимуществ перед glo. Табачная палочка нагревается изнутри, а не по периметру через слой бумаги.На вкус много, а главное, гаджет совместим со стиками HEETS для IQOS, которые можно купить везде. Хотя, конечно, о популярности устройства говорить рано, многое зависит от стоимости.

Подписаться на наши аккаунты:

Factory Smokes Sun Grown от Drew Estate Robusto

Сигары

Bundle очень популярны в большом сегменте сигарной публики, и это сегмент, в котором Drew Estate в значительной степени не была частью на протяжении большей части истории компании.

Все изменилось во время выставки IPCPR Convention & Trade Show 2018, когда компания продемонстрировала линейку сигар в пачках под названием Factory Smokes от Drew Estate. Новый бренд фактически состоит из четырех различных смесей, каждая из которых использует различную обертку на индонезийском связующем и смешанные наполнители из Индонезии: Sun Grown, Maduro, Shade и Sweet.

«Наше расширение в сегменте пакетов было решением, которое мы восприняли нелегко», — сказал Джонатан Дрю, соучредитель и президент компании, в пресс-релизе.«Пакеты не выглядят привлекательными, и эффективность, необходимая для их эффективного производства, нелегко достигнуть, поэтому не так много новичков, занимающихся инновациями в области недорогих цен. Это давно пора для Drew Estate, и когда мы достигли производственных масштабов, необходимых для конкуренции, мы поняли, что хотим делать то, что делаем, и разрушить пространство с помощью инновационной линейки качественных дымовых газов для широкого круга экономных людей. ”

Каждая из четырех купажей производится на одних и тех же четырех витолах, и, хотя существует ряд разных цен, ни одна из сигар не имеет розничной цены выше 2 долларов.63. Все сигары скручиваются в поместье La Gran Fabrica Drew Estate в Никарагуа, и каждая из линий расфасована в пачки по 20:

.

  • Factory Smokes Sun Grown от Drew Estate Robusto (5 x 54) — 2 доллара (связки по 20, 40 долларов)
  • Factory Smokes Sun Grown от Drew Estate Churchill (7 x 50) — 2,25 доллара (связки по 20, 45 долларов)
  • Factory Smokes Sun Grown от Drew Estate Toro (6 x 52) — 2,13 доллара (связки по 20 штук, 42,50 доллара)
  • Factory Smokes Sun Grown от Drew Estate Belicoso (6 x 54) — 2 доллара.63 (Связки по 20 шт., 52,50 долл. США)
  • Сигара Отзыв: Factory Smokes Sun Grown by Drew Estate Robusto
  • Страна происхождения: Никарагуа
  • Завод: La Gran Fabrica Drew Estate
  • Обертка: н / д
  • Переплет: Индонезия
  • Наполнитель: Индонезия
  • Длина: 5 дюймов
  • Кольцевой калибр: 54
  • Vitola: Робусто
  • Рекоменд. Цена: 2 доллара США (комплекты по 20, 40 долларов США)
  • Дата выпуска: Июль 2018
  • Количество выпущенных сигар: Обычное производство
  • Количество выкуриваемых сигар для обзора: 3

Все о фабрике Drew Estate Smoke Sun Grown Robusto кричит rustic , от очень грубой на ощупь обертки, покрытой толстыми прожилками, до отсутствия масла и даже плохо установленного колпачка.Кроме того, сигара становится губчатой ​​при сжатии, и на самом деле видна небольшая часть прессования коробки. Аромат обертки включает нотки кедра, навоза, кожи, сладкого сена и прикосновения кислой земли, в то время как холодное рисование приносит ароматы кедра, опилок, земли и темного шоколада с небольшой кислинкой.

The Drew Estate Factory Smoke Sun Grown Robusto начинается с первой трети с доминирующей земной нотой, наряду с другими ароматами сена, кедра, пекарен, немного корицы и темного шоколада.Заметны легкая пряность и легкая ванильная сладость, а также легкая нотка черного перца на ретрогейле, но ни один из них не является достаточно сильным, чтобы произвести какое-либо впечатление. С точки зрения конструкции ожога достаточно, чтобы его нужно было один раз подправить, в то время как натяжение довольно слабое после неглубокого V-образного среза, а также сильное дымообразование, исходящее от ступни. Общая сила пока чрезвычайно мала и к концу первой трети изо всех сил пытается достичь промежуточной отметки между легкой и средней.

Профиль не сильно изменился во второй трети Factory Smoke Sun Grown, с преобладанием того же песчаного землистого вкуса, за которым следуют более слабые ароматы кедра, темного шоколада, бобов эспрессо и сена. Ванильная сладость первой трети по-прежнему заметна — хотя и не настолько сильна, чтобы оказать серьезное влияние — и на ретрогейле все еще присутствует немного черного перца, но, похоже, в ближайшее время они не станут сильнее. Конструкция значительно улучшилась по сравнению с первой третью, с натяжкой, которая дает мне большое сопротивление, и ожогом, который не вызывает у меня никаких проблем.Что касается силы, Sun Grown Robusto подобрался немного ближе к средней отметке, но все же не успевает до начала последней трети.

Входя в последнюю треть Drew Estate Sun Grown Robusto, знакомая теперь землистая нота продолжает легко быть доминирующим ароматом в профиле, за которым следуют другие ароматы различной силы, включая сено, кедр, темный шоколад, кофейные зерна и легкие оттенки. солодки. Хотя ванильная сладость немного уменьшилась по сравнению с высшей точкой во второй трети, она все еще достаточно сильна, чтобы отличаться, и черный перец остается.Ожог снова становится проблематичным, что приводит к паре подкрашиваний, но розыгрыш остается таким же хорошим, как и всегда, а образование дыма продолжает напоминать мне о горящем доме. Наконец, общая сила немного увеличивается, но едва достигает средней отметки к тому времени, когда я опускаю выступ, оставаясь чуть больше дюйма.

Заключительные ноты

  • Хотя точные обертки для Sun Grown, Shade и Maduro не были раскрыты Drew Estate, они объявили, что обертка для смеси Sweet — хабано.
  • Профиль был для меня немного более интересным, потому что вкусы, которые я выбрал, казались более широкими мазками, чем мелкими изменениями.
  • Все три сигары источали огромное количество дыма, до такой степени, что я извинился перед более чем одним человеком за столом позади меня.
  • Drew Estate рекламируется на Halfwheel .
  • Сигары, выкуренные для этого обзора, были куплены полуколесом .
  • Окончательное время курения для всех трех образцов составило в среднем один час и три минуты.
  • Если вы хотите приобрести сигары Smoke Sun Grown, принадлежащие фабрике Drew Estate, их можно найти у спонсоров сайта Atlantic Cigar Co., Cigars.com, Famous Cigar Shop, JR Cigar, Serious Cigars и Thompson Cigar.

81 год
Общий счет

Я всегда нахожусь в поисках смесей, которые рекомендую подниматься выше соответствующих цен, взимаемых за них, и это очень хороший способ описать Drew Estate Factory Smoke Sun Grown тем, кто еще не пробовал.Нет, он не поразит вас вкусом или сложностью, и это не самый интересный из профилей, но конструкция достаточно приличная и имеет цену, которую трудно превзойти. В конце концов, Factory Smoke Sun Grown лучше, чем ожидает большинство людей, и лучше, чем цена, которую за них взимают.

7 вещей, которые никогда не должны делать курильщики сигар

Любой ценитель сигар скажет вам, что сигары — это хобби, а не привычка.И, как и в любом хобби, есть правильный и неправильный способ делать это.

Мы связались с Майклом Херклотсом, вице-президентом по розничной торговле и развитию бренда сигарного бренда Nat Sherman, и спросили его, чего избегают настоящие ценители при курении сигар.

Независимо от того, новичок вы или эксперт, продолжайте читать, чтобы увидеть семь худших ошибок, которые вы можете сделать, загораясь.

Ошибка № 1: Ожидание, что две сигары будут выкуривать одно и то же.

Flickr / Джерри Болдинг

Сигары премиум-класса — это изделие ручной работы, созданное из сельскохозяйственного урожая. Поскольку в зависимости от используемых смесей, типов табака и того, как были изготовлены сигары, может происходить очень много различий, по словам Херклотса, практически невозможно предсказать, как сигара будет дымиться со 100% уверенностью.

Настоящие ценители сигар знают это и принимают эти небольшие вариации. Вы тоже должны.

Ошибка № 2: Вы думаете, что аромат сигар меняется из года в год, как вино.

Видео Business Insider

Сигары — это невинтажная индустрия, что означает, что производители сигар стараются из года в год обеспечивать одинаковый вкус своих сигар.Они добавляют и переделывают свои табачные смеси, всегда стараясь, чтобы смесь сохраняла тот же вкус, учитывая естественные вариации.

Со временем вкус модели сигары будет меняться, но очень медленно. По словам Херклотса, в краткосрочной перспективе разница незначительна.

Ошибка № 3: Держишь сигару во рту.

Не рекомендуется держать во рту сигару.Flickr / Брайан Ауэр

Сигара — это не то, что нужно «зажать между зубами и щекой и сосать», — говорит Херклотс. Его следует держать в руке и подносить ко рту, чтобы надуть, а затем снова опускать, чтобы свисать между пальцами.

Это также помогает охладителю пригорания сигары, так что вы не тратите впустую драгоценный табак. №

Ошибка №4: Погружение сигары в спирт.

Никогда не окунайте сигару в спирт.

Flickr / Скотт Катлер

Аромат ликера может испортить вкус сигары и сделать его отличным от того, что задумывал производитель сигары.

«Могу вас заверить, что если этот производитель сигар захотел бы коньяк на конце сигары, он бы поместил его туда», — говорит Херклотс.

Ошибка № 5: Вы курите сигары только одной марки или типа.

Выкурите много разных сигар, чтобы увидеть, что вам нравится.Flickr / Христианский парень

Конечно, у вас может быть предпочтительный бренд. Но не позволяйте ошибочному чувству долга или лояльности к определенному бренду помешать вам попробовать несколько сортов сигар.

Херклотс говорит, что в его репертуаре от 10 до 12 сигар разных типов и марок. Это отличная цель для любого серьезного курильщика сигар. №

Ошибка №6: Курить то, что курят все остальные.

Фото AP

Не курите только ту же жирную сигару, с которой курит генеральный директор, с которым вы встречаетесь.Гораздо лучше спросить окружающих вас экспертов, что вам может понравиться, вместо того, чтобы рубить легкое и тратить зря сигару.

Это особенно хороший совет для новичков, которым еще не очень комфортно курить сигары, говорит Херклотс.

Ошибка № 7: Вдыхание сигарного дыма.

Никогда не вдыхайте.Flickr / Джорджио

Вы должны никогда не вдыхать во время курения сигары. Это не сигареты, а табак часто намного крепче.

Вместо этого просто сделайте затяжку и дайте ей посидеть во рту на несколько секунд, пока вы пробуете ее на вкус. Тогда просто выдуйте его. Затягивайте и вращайте сигару каждые 30 секунд — одну минуту и ​​наслаждайтесь крепким алкогольным напитком.

СЕЙЧАС ПОСМОТРЕТЬ: 4 настоящих робота, призванные облегчить жизнь

Пожалуйста, включите Javascript, чтобы посмотреть это видео

.