webof-sar.ru | 100000p
Автор:
Павел
Рубрика:
Заработать без сайта
webof-sar.ru
webof-sar.ru — букс, на котором можно заработать на серфинге сайтов, чтении писем, прохождении тестов, выполнении заданий, реферальной программой. Рекламодатель имеет большие возможности по рекламе своего сайта, продукта при помощи: Серфинга, Оплачиваемых писем, Псевдо ссылок, Статических ссылок, Баннеров, Контекстной рекламы, Рекламных цепочек, Текстовых объявлений, Ссылок во фрейме, Рассылки на e-mail, Оплачиваемых тестов, Пакетов рекламы, Каталога сайтов.
Проходим регистрацию.
Попадаем на главную страницу, находим раздел «Заработок».
Серфинг сайтов.
Нажимаем в меню «серфинг сайтов», в начале страницы будут статические ссылки, за которые исполнитель не получает оплату (оплпту получает сервис от рекламодателя). Платные ссылки для серфинга находятся ниже.
Прокрутив страницу вниз видим список ссылок для серфинга. Нажимаем на любую.
Попадаем на рекламируемый сайт. Вверху слева находится таймер просмотра рекламы.
По его окончании появляется капча в виде суммы или разности чисел. Нажимаем правильный ответ.
Появляется надпись, что оплата за просмотр зачислена.
Можно переходить к следующей ссылке.
Чтение писем.
Нажимаем в меню «чтение писем», видим список ссылок на рекламные письма. Нажимаем на любую ссылку.
В письме находится рекламная информация.Рекламодатель хочет, чтобы Вы ее прочитали и нашли ответ на контрольный вопрос.
Выбрав правильный ответ, попадаете на рекламируемый сайт, где снова видите таймер.
Затем капчу. ..
И сообщение о зачислении вознаграждения.
Можно переходить к следующему письму.
Прохождение тестов.
Нажимаем в меню «прохождение тестов», видим список ссылок на тесты. Нажимаем на любую ссылку.
Появляется инструкция по выполнению теста. После прохождения необходимо ответить на 3 контрольных вопроса и после этого ждать от рекламодателя оплаты.
Пока рекламодатель проверяет выполнение (если его нет на сервисе, тогда оплата поступит позже), можете выполнять другие тесты.
Выполнение заданий.
Нажимаете в меню «выполнение заданий», появляется список заданий. Они могут быть различными: пройти простую регистрацию на сайте, YouTube клики, подписка на канал, Поделиться записью в одной из соц. сетей, Посмотри 5 роликов, Вступить в группу!, Просмотри ссылки, разгадай капчу, получи за это деньги, Найти в GOOGLE+3 перехода по страницам, И поиграем и немного заработаем!, Вступить в Группу на Одноклассниках, установка приложения, Два видео и реклама, Оцифровка видео (Яндекс-соц. сети), Оставить ссылку, Мобильный заработок, Подписка!, Клики по рекламе…
Нажимаете на любое понравившееся.
Получаете инструкцию по выполнению и описание необходимого отчета о выполнении.
Партнерская программа.
Здесь четко описано, за что и сколько Вы будете получать отчислений с каждого привлеченного работника, рекламодателя.
Реферальные ссылки находятся в меню «Работа с рефералами» — «пригласить рефералов»
Также Вам предоставят разнообразные баннеры.
Ярмарка рефералов.
На ярмарке можно купить и продать рефералов.
Возможности для рекламодателя.
Нажмите в меню кнопку «рекламодатель».
Реклама серфингом.
Заполняете URL сайта, заголовок ссылки(любой), описание ссылки(любое), количество желаемых просмотров 100=минимум, время просмотра до 120 секунд (дороже). Нажмите «оформит заказ». В дополнительных настройках можно установить ограничение показов в сутки и в час, но это если Вы заказали например 1000 просмотров. Ставите 100 в сутки, 5 в час — равномерно распределив на весь день. Конечно, если для Вас главное количество рекламных просмотров, то никаких ограничений ставить не надо.
Появится описание Вашего рекламного заказа, проверяйте и нажимайте «оплатить». Вас перебросят на страницу выбора платежных систем, где Вы переведете нужную сумму.
После перевода суммы нажмите «управление рекламой». Увидите блок управления Вашей рекламой «серфинг». Она уже автоматичкски запущена. Ее можно остановить, редактировать, удалить, пополнить сумму.
Реклама статическими ссылками.
Статические ссылки равсполагаются на страницах webof-sar.ru. Исполнитель за клики на них не получает вознаграждение, поэтому они расчитаны «на заинтересованного пользователя». Оплата производится за дни показа.
Рекламная цепочка.
В рекламной цепочке находится 5 ссылок. Вы платите 1 раз и ссылка становится первой. По мере пополнения заказов другими рекламодателями она опускается на 2,3,4,5 место и затем пропадает. Но может и «провисеть » долго. После «ухода «ссылки, необходимо оплатить снова.
Рекламная рассылка на E-mail.
Вы создаете рекламное письмо и оно рассылается на почтовые ящики пользователей.
Реклама оплачиваемыми письмами.
Пишите рекламную информацию, создаете контрольный вопрос(чтобы убедиться что исполнитель ее читал) и это письмо появится в разделе для заработка — «чтение писем»
Реклама баннерами.
Вы помещаете свой рекламный баннер на страницы webof-sar.ru. Оплата по времени показа баннера — 1 день минимум.
Реклама текстовыми объявлениями.
Отличается от статической ссылки наличием рекламного текста до 255 символов. Оплата за время показа — 1 день минимум.
Реклама оплачиваемыми тестами.
Один из наиболее эффективных способов рекламы и создания активности на Вашем сайте. В инструкции Вы можете попросить исполнителя посетить сайт, переходить по страницам , разделам меню, кликать по рекламе…да все что угодно. Мотивация — посититель будет искать 3 ответа к трем контрольным вопросам на страницах Вашего сайта(согласно Вашей инструкции).
Псевдо ссылки.
Аналогично статическим ссылкам.
Контекстная реклама.
Контекстная реклама оплачивается по количеству переходов по ссылке. Находится в специальном разделе «Контекстной рекламы».
Ссылки во фрейме.
Ссылки с рекламой(до 255 символов) будут появляться во фреуйме(рядом с таймером просмотра рекламы). Оплата производится за врямя показа — 1 день минимум.
Каталог сайтов.
В webof-sar.ru в определенном разделе есть каталог сайтов — статические ссылки рекламируемых ресурсов. Ваша ссылка будет размещена и проиндексирована поисковыми роботами, что положительно скажется на тИЦ рекламируемого сайта. Ссылки размещаются на то количество дней, которое Вы оплачиваете.
Отзывы, анализ посещаемости- здесь.
Перейти на страницу «Все способы заработка в интернете».
Webof-sar.ru не работает сегодня только у меня? Статус Webof-sar.ru
Статус сервера
онлайн
Код состояния
200
Время отклика
1. 917 sec
Узнайте, работает ли Webof-sar.ru в нормальном режиме или есть проблемы сегодня
Не открывается, не грузится, не доступен, лежит или глючит?
Самые частые проблемы Webof-sar.ru
Не определены.
Что делать, если сайт WEBOF-SAR.RU недоступен?
Если WEBOF-SAR.RU работает, однако вы не можете получить доступ к сайту или отдельной его странице, попробуйте одно из возможных решений:
Кэш браузера.
Чтобы удалить кэш и получить актуальную версию страницы, обновите в браузере страницу с помощью комбинации клавиш Ctrl + F5.
Блокировка доступа к сайту.
Очистите файлы cookie браузера и смените IP-адрес компьютера.
Антивирус и файрвол.
Проверьте, чтобы антивирусные программы (McAfee, Kaspersky Antivirus или аналог) или файрвол, установленные на ваш компьютер — не блокировали доступ к WEBOF-SAR.RU.
DNS-кэш.
Очистите DNS-кэш на вашем компьютере и повторите попытку доступа на сайт.
Смотреть видео-инструкцию ↓
youtube.com/embed/x1d35uqD-pc» frameborder=»0″ allow=»accelerometer; clipboard-write; encrypted-media; gyroscope; picture-in-picture» allowfullscreen=»»/>
VPN и альтернативные службы DNS.
VPN: например, мы рекомендуем NordVPN.
Альтернативные DNS: OpenDNS или Google Public DNS.
Плагины браузера.
Например, расширение AdBlock вместе с рекламой может блокировать содержимое сайта. Найдите и отключите похожие плагины для исследуемого вами сайта.
Сбой драйвера микрофона
Быстро проверить микрофон: Тест Микрофона.
MoneySoft — Vebof — Sar
Пользователям —
Webof — sar. ru – современный проект для заработка
не требует каких — либо навыков. Все что Вам потребуется,
авторизоваться в WebMoney и пройти простую регистрацию,
после которой Вам станут доступны все разделы сайта
и множество способов заработка. Наша система постоянно усовершенствуется, добавляются новые функции дохода .
Минимальной суммы для выплаты денежных средств НЕТ
На данный момент WEBOF — SAR поддерживает следующие
виды заработка — оплата за серфинг, оплата за авто-серфинг,
чтение оплачиваемых писем, платные вопросы, оплата за скачивания, оплата за задания. Реферальная система.
Набрав определенное число рефералов — Вы обеспечите
свой стабильный доход на долгие годы — Все зависит от Вас .
Клик — 0.023 + Serfer Реф.клик — 1ур 60% — 2ур 15% — 3ур 5%
Рекламодателям
Мы подготовили большой набор качественных услуг для размещения рекламы. Рекламодателю на проекте предоставлен свой личный «Кабинет», в котором есть возможность комфортно управлять своими рекламными продуктами. Заказчику рекламы необязательно быть зарегистрированным пользователем проекта. Для оформления заказа со скидкой, рекламодателю необходимо авторизоваться в своем «Кабинете рекламодателя» и после этого перейти к заказу. Скидка на размещение всей рекламы, составляет до — 30 %.
Что мы Вам предлагаем ? Это двенадцать видов эффективной недорогой рекламы, раскрутка и продвижение сайта повышение — ТИЦ. Низкие цены на все услуги размещения рекламы, Ваш сайт будет показан больше чем вы заказали, таймер посещений 20 —
120 сек. с переходом на сайт, расширенная система подбора аудитории, проверенная долгим временем защита от накруток, поднятие до первых позиций в поисковой выдаче, возможность заказа пакета рекламы со скидкой, возможность выделить ссылку красным цветом, конкурсы для самых активных рекламодателей.
Оперативная служба технической поддержки — 24 часа в сутки
Различная форма оплаты рекламы и пополнение внутреннего счета WebMoney — «ROBO KASSA» — LiqPay — DELTA KEY
Мы гарантируем, что Вы получите то количество уникальных посетителей, которое оплатили — Раскрутка сайта в нашей системе, это эффективный инструмент увеличения продаж Вашей компании .
№ | САР | Рейтинг | Описание | Ссылка |
---|---|---|---|---|
1 | 5+ | SEO — FAST СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ. | Регистрация | |
2 | 5 | PROFITCENTR СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ. | Регистрация | |
3 | 5 — | SocPublic ПОСЕЩЕНИЯ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ. | Регистрация | |
4 | 5 — | WMRFast СЕРФИНГ, ПОСЕЩЕНИЯ, ЗАДАНИЯ. | Регистрация | |
5 | 5 — | WMmail ПИСЬМА, ЗАДАНИЯ. | Регистрация | |
6 | 5 | IPWeb ЗАДАНИЯ В АВТОПРОГРАММЕ БЫСТРО | Регистрация | |
7 | 4 | IP Gold ЗАДАНИЯ В АВТОПРОГРАММЕ БЫСТРО | Регистрация | |
8 | 5 | Webof-sar СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ | Регистрация | |
9 | 4 | Sharkpromotion СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ Бывают перебои с выплатами. | Регистрация | |
10 | 4 | RusRhino СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ Бывают перебои с выплатами. | Регистрация | |
11 | 5 | Kuban-bux СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ | Регистрация | |
12 | 5++ | Dynamic-company СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ. Чат с оплатой за сообщения. Возможность инвестировать в покупку криптовалюты. Место сбора новых людей, желающих обучаться и совершенствоваться. Регистрируемся и задаем вопросы по внутренней почте. | Регистрация | |
13 | 5 | TUSHINS СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ. | Регистрация | |
14 | 5 | ZONAPROFITA | МНОГО СЕРФИНГА, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ. | Регистрация | |
15 | 5 | AVISO | СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ТЕСТЫ, ЗАДАНИЯ, YouTube, ВК. | Регистрация | |
16 | 5 | AD-CORE | СЕРФИНГ, ПИСЬМА, ЗАДАНИЯ, YouTube, ВК, ОК, TELEGRAM. .. | Регистрация | |
17 | 5 | UNU | Биржа микрозадач. Заработок на самых простых действиях. Лайки, репосты, вступления, подписки, комментарии, и многое другое… Заданий много. | Регистрация | |
18 | 5 ++ | БИРЖА ОТЗЫВОВ И КОММЕНТАРИЕВ | Регистрация | |
19 | 5 ++ | БИРЖА КОПИРАЙТИНГА | Регистрация | |
20 | 5 ++ | БИРЖА КОПИРАЙТИНГА | Регистрация | |
21 | 5 | ETXT БИРЖА КОПИРАЙТИНГА 38684 | Регистрация |
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Персональный сайт — заработок в интернете
Приветствую!
заработок на заданиях
Наша цель заработать самим и помочь другим увеличить свои заработки.
Смысл работы очень прост, если Вы читаете эти строки, значит Вы также, по всей вероятности зарабатываете на кликах. Я создал оплачиваемые задания на нижеперечисленных сайтах, если Вы не зарегистрированы на каком-то из них регистрируйтесь по моим ссылкам:
1 SEO sprint – Наверное самый популярный задание№155996
2 webof-sar.ru – Мой любимый сайт задание № 811
3 ProfiTCentR – Очень неплохой задание № 28842
4 Sprint-cap.ru Работаю на нем почти год задание № 173
5 hitbux.ru Также мне нравиться задание № 224
6 spartak-bux. Много работы задание № 1469
7 staffbux.ru Работаю на нем год задание №1020
8 streamwm. ru Работаю на нем почти год задание№ 5120
9 ksv-sar.ru Неплохой задание № 51
10 best-sar.ru Очень неплохой
11 kuban-bux.ru Много работы задание № 1819
12 almazz-bux.info Много работы задание № 1171
13 orangebux.ru ru Неплохой задание № 2434
14 wmreklama.com Много работы задание № 1290
15 service-pay.ru Очень неплохой задание № 383
16 cashtaller. ru много писем и заданий задание № 20881
17 ebesucher. автосерфинг открыл и забыл !
18 greenstree.ru Очень неплохой задание № 9717
19 bocman-bux.ru Очень неплохой задание № 526
20 sunbux.ru Неплохой задание № 271
21 icebergbux.ru Неплохой задание № 492
22 wrcbux.ru Работа есть стабильно задание № 168
23 bux-pro.net новый
24 rubserf.ru Работа есть стабильно
25 seo-pult.org новый мне нравиться
26 wmdoza.com новый мне нравиться
27 seoint.ru мне нравиться
28 vipip.ru работает программка
29 web-sar. ru есть игры довольно интересный
30 uniq-ip в яндекс бар установи программу и заработай 20 центов не напрягаясь
bolezneu.net
В дальнейшем количество сайтов будет добавлено. Всем кто не зарегистрирован на каком-то сайте из указанных выше приглашаю в нашу команду для совместного зарабатывания!
Желаю удачи !
Заработок в интернете, в сети. Работа в интернете без вложений. Лучший сайт. Заработать деньги в интернете на кликах. Заработать в интернете деньги быстро без вложений. Заработать на опросах. Кликай дома и зарабатывай. Где взять дополнительный доход?
Вступай в нашу
группу в контакте! и узнай:
Работоспособная СХЕМА! Если ты реально хочешь ПОЛУЧАТЬ
ПРИБЫЛЬ ДОСТОЙНО!
Для данного
вида заработка Вам не понадобится
тратить
целый день, хватит уделить работе 1-2
часа. Я например занимаюсь этим
1 час утром и 1 час вечером.
Работа на дому.
1.
Первым делом заведите себе электронный кошелек. Например на
WebMoney.
2. Ниже находятся ссылки.
Регистрируйтесь на них и действуй! Работы
хватит всем!
3. Желаю удачи! И помните — чем больше рефералов, тем больше денег!
Хочу предложить Вам действительно
надежные сайты. Сама в них работаю и Вам рекомендую. Минимальной
суммы для выплаты НЕТ. Моментальные переводы. Серфинг, задания, реф система.
Надежные буксы:
(клики, задания и т.п.)
Что делать?
Зарегистрируйтесь на сайтах (расположенных ниже). Просматривайте сайты, читайте письма рекламодателей, выполняйте
несложные и интересные тесты и задания за вознаграждение. Для этого
Вам не потребуются какие-либо особые навыки или уйма времени. Вы
можете находиться где угодно и работать когда угодно! Все выплаты в
системе производятся мгновенно. Начисления сбалансированы и
стабильны. Вы сможете получить свои первые деньги уже сразу после
начала работы. С нами надёжно и комфортно. Зарабатывайте столько,
сколько захотите.
www.webof-sar.ru www.profitcentr.com www.neobux.com | www.seosprint.net www.seo-pult.org www.service-pay.ru
| |
Партнерские программы: Что делать? Зарегистрируйся на сайте ПАРТНЕРОМ. Далее, начинайте рассылать ссылку. Как только любой пользователь интернета переходит по Вашей А так же, не менее важный момент, что с каждого Вашего | ||
www.2lemoney.ru
|
| |
Бесплатная раскрутка Вашего сайта: (обмен посетителями) | ||
www.ebesucher.ru
|
Реферальные ссылки обновляются! |
баз данных и стратегии поиска COVID-19 — ресурсы COVID-19
Ассоциация медицинских библиотек курирует коллекцию стратегий поиска COVID-19 по различным темам и базам данных. Вы можете найти эти стратегии поиска здесь: Поиск литературы по COVID-19
PubMed Clinical Queries теперь имеет фильтр для статей о COVID 19 на главной странице поиска. Это позволяет ограничить результаты поиска статьями о COVID-19: PubMed Clinical Queries
Вот стратегии поиска, созданные библиотекарями Becker, которые вы можете скопировать / вставить в базы данных, чтобы найти исследования COVID-19.Вы можете комбинировать (используя AND) их с другими концепциями, чтобы просматривать статьи по конкретным темам, связанным с COVID-19 (например, термины AND COVID-19 с терминами вакцины, чтобы найти исследования об исследованиях вакцин).
PubMed
(((«COVID-19» [Дополнительная концепция] ИЛИ «Диагностическое тестирование COVID-19» [Дополнительная концепция] ИЛИ «Медикаментозное лечение COVID-19» [Дополнительная концепция] ИЛИ «Серотерапия COVID-19» [Дополнительная концепция] ИЛИ » Вакцина COVID-19 »[Дополнительная концепция] ИЛИ« коронавирус 2 тяжелого острого респираторного синдрома »[Дополнительная концепция] ИЛИ« Спайк гликопротеин, вирус COVID-19 »[Дополнительная концепция] ИЛИ« 2019-nCoV »ИЛИ« 2019nCoV »ИЛИ« cov 2 ИЛИ «Covid-19» ИЛИ «sars coronavirus 2» ИЛИ «sars cov 2» ИЛИ «SARS-CoV-2» ИЛИ «коронавирус 2 тяжелого острого респираторного синдрома» ИЛИ «коронавирус 2» ИЛИ «COVID 19» ИЛИ «COVID- 19 »ИЛИ« 2019 ncov »ИЛИ« 2019nCoV »ИЛИ« коронавирус 2019 »ИЛИ« cov2 »ИЛИ« COVID-19 »ИЛИ« COVID19 »ИЛИ« nCov 2019 »ИЛИ« nCoV »ИЛИ« новый вирус короны »ИЛИ« новый коронавирусы »ИЛИ« новый вирус короны »ИЛИ« новые коронавирусы »ИЛИ« Коронавирус SARS 2 »ИЛИ« SARS2 »ИЛИ« SARS-COV-2 »ИЛИ« Коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома 2 ») ИЛИ ((19 [tiab] OR 2019 [tiab] ИЛИ «2019-nCoV» ИЛИ «Пекин» ИЛИ «Китай» ИЛИ «Covi d-19 »ИЛИ эпидемия * [tiab] ИЛИ эпидемия * ИЛИ эпидемия ИЛИ новая [tiab] ИЛИ« новая »[tiab] ИЛИ« вспышка »ИЛИ пандемия * ИЛИ« SARS-CoV-2 »ИЛИ« Шанхай »ИЛИ« Ухань » ) И («Коронавирусные инфекции» [сетка] ИЛИ «коронавирус» [Условия MeSH] ИЛИ коронавирус * [все] ИЛИ коронавирус * [все] ИЛИ cov [tiab] ИЛИ вирус пневмонии * [tiab]))) И 2019 / 12/1: 3000/12/31 [PDAT])
Набережная
((‘Тяжелый острый респираторный синдром, коронавирус 2’ / exp OR (‘2019-nCoV’ OR ‘2019nCoV’ OR ‘cov 2’ OR ‘Covid-19’ OR ‘sars coronavirus 2’ OR ‘sars cov 2’ OR ‘SARS -CoV-2 ‘ИЛИ’ тяжелый острый респираторный синдром коронавирус 2 ‘ИЛИ’ коронавирус 2 ‘ИЛИ’ COVID 19 ‘ИЛИ’ COVID-19 ‘ИЛИ’ 2019 ncov ‘ИЛИ’ 2019nCoV ‘ИЛИ’ болезнь коронавируса 2019 ‘ИЛИ’ cov2 ‘ ИЛИ ‘COVID-19′ ИЛИ ’COVID19′ ИЛИ ’nCov 2019′ ИЛИ ’nCoV’ ИЛИ ’новый вирус короны’ ИЛИ ’новые коронавирусы’ ИЛИ ’новый вирус короны’ ИЛИ ’новые коронавирусы’ ИЛИ ’SARS Coronavirus 2′ ИЛИ ’SARS2 ‘OR’ SARS-COV-2 ‘OR’ тяжелый острый респираторный синдром, коронавирус 2 ‘): ti, ab, kw OR (((19 OR 2019 OR’ 2019-nCoV ‘OR’ Beijing ‘OR’ China ‘OR’ Covid-19 ‘ИЛИ эпидемия * ИЛИ эпидемия * ИЛИ эпидемия ИЛИ новая ИЛИ’ новая ‘ИЛИ’ вспышка ‘ИЛИ пандемия * ИЛИ’ SARS-CoV-2 ‘ИЛИ’ Шанхай ‘ИЛИ’ Ухань ‘): ti, ab, kw И (‘ Coronavirinae ‘ / exp ИЛИ «Коронавирусная инфекция» / exp ИЛИ коронавирус *: ti, ab, kw ИЛИ коронавирус *: ti, ab, kw ИЛИ cov: ti, ab, kw ИЛИ «вирус пневмонии *»: ti, ab, kw ))) AND (2019: py OR 2020: py))
Web of Science (изменено на основе стратегии поиска, представленной Web of Science)
TS = («Уханьский коронавирус» ИЛИ «COVID19 *» ИЛИ «COVID-19 *» ИЛИ «COVID-2019 *» ИЛИ «коронавирусная болезнь 2019» ИЛИ «SARS-CoV-2» ИЛИ «2019-nCoV» ИЛИ «2019 новый коронавирус »ИЛИ« тяжелый острый респираторный синдром, коронавирус 2 »ИЛИ« новая коронавирусная инфекция 2019 г. »ИЛИ« коронавирусная болезнь 2019 г. »ИЛИ« коронавирусная болезнь-19 »ИЛИ« SARS-CoV-2019 »ИЛИ« SARS-CoV-19 »)
Улучшено: ГОДЫ ПУБЛИКАЦИИ: (2020 ИЛИ 2019)
Google Scholar
«COVID 19» | «COVID-19» | ИЛИ «SARS-CoV-2» | 2019 nCoV | «2019 nCoV | CoV | коронавирус» | «Роман 2019 | новый коронавирус | cov» | «ухань коронавирус | cov | ncov | вспышка | «ухань ** коронавирус | cov | ncov | вспышка» | «коронавирус | cov |
Web of Science — Метрики владения и пользования: поиск цитируемой ссылки
Ввод поиска
Web of Science также предоставляет специальный поиск по авторам для поиска всех публикаций одного автора.Поиск — это многоэтапный процесс, чтобы убедиться, что выбран правильный автор (особенно если у автора может быть обычное имя).
Сначала выберите « Core Collection » в раскрывающемся меню «Выбрать базу данных» над полем поиска. Затем нажмите « Author Search ».
Затем введите фамилию автора, которого вы ищете, в поле Фамилия . Поиск автоматически выдаст некоторые результаты, из которых вы можете выбрать, но вы также можете ввести все, что захотите.Введите первое начальное число в поле Имя и отчество .
СОВЕТ: Если вы не уверены, как автора могли цитировать (т. Е. Только имя, имя и отчество, только первые и средние инициалы), рекомендуется ввести ТОЛЬКО первый инициал. имени автора. На следующем экране у вас будет возможность просмотреть всех авторов с указанием фамилии и первого имени, которое вы ввели (включая дополнительные параметры для сужения поиска).
СОВЕТ: Вы также можете выполнить поиск по Web of Science ResearcherID или номеру ORCID, если у вас есть такая информация.
После того, как вы ввели фамилию и первые инициалы, нажмите кнопку НАЙТИ. После этого вы попадете на экран результатов .
На странице Results вы можете увидеть всех авторов, которые соответствуют критериям поиска, введенным на предыдущем экране. Может быть несколько результатов, которые представляют одного и того же автора, если автор использовал разные варианты своего имени в разных публикациях.Просмотрите информацию об учреждении для перечисленных авторов. Вы также можете сузить до тематических категорий , если есть авторы с похожими именами, но публикующиеся в разных предметных областях.
Установите флажки рядом с перечисленными авторами, которые, по вашему мнению, соответствуют автору, которого вы ищете. Вам нужно только установить флажки, если выбрано более одного автора, так как это объединит записи. Затем нажмите кнопку Просмотр объединенной записи в верхней части результатов поиска в правой части экрана.Если для автора, которого вы ищете, существует только один результат, просто щелкните имя этого автора, чтобы выбрать его.
После выбора соответствующих имен авторов на экране результатов вы попадете на страницу Author Record . Если вы ищете себя, вы можете заявить права на запись как на свою. В противном случае вы можете просмотреть информацию об авторе на этом экране по мере необходимости, включая H-индекс, сумму цитирований, альтернативные имена, под которыми опубликовал автор, информацию об организации, а также список публикаций.
Чтобы просмотреть весь список публикаций, нажмите кнопку «Просмотреть как набор результатов для экспорта, анализа и ссылки на полный текст» .
Руководства пользователя — Sentinel-1 SAR — Sentinel Online
Руководство пользователя SENTINEL-1 содержит подробное описание доступных режимов работы прибора и продуктов. Он также включает введение в соответствующие области применения, информацию о распределении данных, форматировании продукта и программных инструментах, доступных в ESA.
Категории:
- Обзор
Дает краткое описание миссии, данных, которые она собирает, и их основных целей. - Applications
Описывает поддержку миссии SENTINEL-1 в трех прикладных областях GMES, таких как морской мониторинг, мониторинг земли и управление чрезвычайными ситуациями, и обеспечивает отображение продукта SENTINEL-1 в приложение. - Режимы сбора данных
Описывает режимы сбора данных SENTINEL-1: Stripmap, Interferometric Wide Swath, Extra Wide Swath и Wave - Типы продуктов и уровни обработки
Описывает уровни обработки, на которых предоставляются продукты SENTINEL-1 — Уровень-0, Уровень-1 и Уровень-2 - Разрешения
Описывает разрешения, доступные для каждого уровня и типа продукта. - Revisit and Coverage
Описывает частоту повторных посещений и зону покрытия, обеспечиваемую основными режимами SENTINEL-1. - Соглашения об именах
Описывает соглашения об именах данных, используемые для папок и файлов продукта SENTINEL-1. - Форматы данных
Описывает БЕЗОПАСНЫЙ формат данных, в котором распространяются продукты SENTINEL-1, и знакомит с концепцией срезов продукта. - Программные средства
Описание программных инструментов NEST и PolSARPro для работы с информационными продуктами SENTINEL-1. - Определения
Предоставляет информацию об условиях, используемых при приобретении и переработке продуктов SENTINEL-1.
Подробное описание продуктов и алгоритмов миссии, а также подробную информацию о приборе SAR и его характеристиках можно найти в Техническом руководстве SENTINEL-1. Подробная информация, доступная в Техническом руководстве, ориентирована на таких пользователей, как ученые и промышленные инженеры-программисты, у которых есть предыдущий опыт выполнения аналогичных миссий EO и глубокий опыт манипулирования данными и управления ими.
Экономический цикл и экономические последствия глобальной пандемии SARS-CoV-2 в Чешской Республике
SHS Web of Conferences 92 , 01056 (2021)
Экономический цикл и экономические последствия глобальной пандемии SARS-CoV-2 в Чехии Республика
Jolana Volejníková * и Ondřej Kuba
Пардубицкий университет, факультет экономики и управления, факультет экономических наук, Студенческая 84, 532 10 Пардубице 2, Чешская Республика
* Автор, ответственный за переписку: [email protected]
Аннотация
Предпосылки исследования: Глобальная пандемия SARS-CoV-2 беспрецедентна для человеческого общества. Коронавирус кардинально меняет жизнь людей, и, несмотря на неопределенность в отношении будущего, несомненно, что его глобальные последствия будут иметь множество аспектов. Нельзя отрицать, что произошли значительные экономические последствия являются несомненными сегодня последствия. Чешская экономика, как и остальной мир, переживает неожиданный экзогенный шок.Это существо проявляется с разной интенсивностью как на уровне субрынков, так и на стороне совокупного спроса и предложения. Это буквально хрестоматийный пример, объясняющий начало фазы спада делового цикла. Тем не менее, внезапное замедление экономической активности в результате пандемии коронавируса, карантина и чрезвычайного положения имеет множество особенностей в разных странах.
Цель статьи: Основная цель статьи — проанализировать экономические последствия пандемического кризиса в реальности Чешской Республики.На этой основе он определяет специфику пандемического кризиса в контексте более широкой основы экономических теорий деловых циклов.
Методы: Аналитическая часть статьи подготовлена на основе общедоступных статистических данных и экономических прогнозов. Вывод и аргументация выводов основаны на эмпирически-индуктивном подходе, методах синтеза и сравнения.
Выводы и добавленная стоимость: В статье отображены прямые и опосредованные бизнесом экономические контексты экономического цикла, вызванного пандемией коронавируса, в реальности Чешской Республики. Он определяет различия и особенности нисходящей фазы экономического цикла пандемии и выводит их возможные долгосрочные последствия. На теоретическом уровне цель статьи — привнести новые знания в современную экономическую теорию бизнес-циклов.
Ключевые слова: глобализация / SARS-CoV-2 / рынки и экономика / Теория деловых циклов / Чехия
Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License 4.0, который разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.
The Web of Language
Защита по второму импичменту Дональда Трампа основывалась в значительной степени на утверждении, что его пламенные слова в адрес протестующих 6 января защищены Первой поправкой. Сенаторы-республиканцы использовали свободу слова — наряду с другими предлогами — чтобы игнорировать серьезные преступления и проступки Трампа. Но они ошибались. Подстрекательство Трампа не было защищенной речью.Его слова представляли очевидную и очевидную опасность.
В соответствующей части Первой поправки говорится: «Конгресс не принимает никаких законов. . . ограничение свободы слова ». Но «нет» в Конституции не означает «нет». Непристойности, драки и угрозы никогда не были защитой речи. Преступный сговор не защищен. Нет и подстрекательства к беспорядкам. Свобода слова никогда не бывает абсолютной. Как выразился судья Оливер Венделл Холмс в первом решении Верховного суда о свободе слова: «Самая строгая защита свободы слова не защитит человека от ложного огня в кинотеатре, вызывающего панику» ( Schenck v.США, 1919). Подтвердив убеждения двух участников протестов против призыва в армию во время Первой мировой войны, Суд постановил, что речь, которая представляет «явную и реальную опасность» для нации, не может прикрываться Первой поправкой.
В своей записке защиты от импичмента адвокаты Трампа сослались на два важных решения Первой поправки: Уоттс против Соединенных Штатов (1969) и Бранденбург против Огайо (1969). Это было небрежно. Ни один из этих случаев не имеет отношения к подстрекательству Трампа.
Роберт Уоттс был старшеклассником, участвовавшим в учениях против войны во Вьетнаме.Он сказал небольшой группе из десяти или пятнадцати человек, обсуждающих проект: «Если они когда-нибудь заставят меня носить винтовку, первым, кого я хочу, чтобы я увидел, будет Л.Б.Дж.» Уоттс не собирался никого убивать — люди смеялись, когда он изображал, как целится из воображаемой винтовки в воображаемого Линдона Джонсона. Но полиция наблюдала. Они арестовали Уоттса, и он был осужден за угрозу убить президента. Верховный суд отменил это обвинение, поскольку слова Уоттса, хотя и преувеличенные и, возможно, неправильно выбранные, не представляли явной и реальной опасности для президента.Вместо этого они были защищены политическими выступлениями.
А вот пример Кларенса Бранденбурга. Бранденбург был членом Ку-клукс-клана. Он пригласил тележурналиста снять кланский «митинг» дюжины мужчин в простынях на удаленном фермерском поле, где они сожгли крест и угрожали евреям и чернокожим. Но Верховный суд отменил приговор Бранденбургу, потому что его слова, хотя и ненавистные, были сказаны небольшой группе людей в отдаленном месте и не оказали немедленного разрушительного воздействия.В , Бранденбург, Суд установил новый способ измерения явной и реальной опасности: речь, которая может привести к «неминуемому беззаконию», не имеет защиты Первой поправкой.
Контекст слов Трампа сильно отличается от обстановки, в которой говорили Уоттс и Бранденбург. Их речь была защищена, потому что в данных обстоятельствах их небольшая аудитория не могла воздействовать на слова говорящих. Напротив, Трамп обратился к многотысячной толпе, готовой к действиям. Многие из слушателей, по их собственному свидетельству, ждали его приказа, желая, чтобы он обрушил их на незащищенный Капитолий.
Трамп более часа говорил на своем давно запланированном митинге, митинг, который он обещал, будет «диким». Он месяцами заряжал свою аудиторию, повторяя ложь о том, что выборы украли у него, и у них. Его риторика была жестокой. 6 января Трамп более двадцати раз употребил слово « против », когда призвал своих слушателей пройти по Пенсильвания-авеню к Капитолию, чтобы «остановить воровство» и вернуть свою страну. Аудитория поверила ему на слове: они шли и дрались.Они были подготовлены именно к этому, многие в военной форме и с оружием, хотя в округе Колумбия ношение огнестрельного оружия без разрешения запрещено. Выслушав Трампа, сотни из них ворвались в Капитолий и ринулись через коридоры Палаты представителей и Сената, сражаясь с полицией, выслеживая законодателей и скандируя «Повесьте Майка Пенса». Это был учебник неминуемого беззакония.
Для обоснования обвинения в подстрекательстве необходимы два элемента: подстрекательские слова и намерение говорящего посеять хаос.Адвокаты Трампа заявили, что его речь была гиперболической, чтобы ее нельзя было понимать буквально. И он не хотел, чтобы кто-то нарушал закон. Лидер сенаторского меньшинства Митч МакКоннелл не согласился. Он думал, что слова Трампа напрямую привели к бунту в Капитолии. МакКоннелл объяснил, что проголосовал за оправдание Трампа, потому что считал, что бывшим президентам нельзя подвергнуть импичмент, хотя именно МакКоннелл предотвратил импичмент, пока Трамп все еще занимал свой пост. Но, по мнению МакКоннелла, Трамп был виноват.
Как измерить намерения говорящего? Существует объективная проверка: сможет ли разумный человек, услышав слова, понять их как подстрекательство? Или они будут извинять оратора как просто увлеченного или даже просто шучу? Но объективный, разумный человек может недостаточно хорошо понимать контекст, чтобы оценить душевное состояние говорящего.Так что есть и более субъективная проверка намерений. Оратор может быть виновен в подстрекательстве, если он знал, что его слова могут привести к беззаконным действиям, но все равно произнесли их, либо потому, что говорящий хотел, чтобы это беззаконное действие произошло, либо его просто не заботило, что его слова приведут к бунту. .
Существует множество свидетельств, подтверждающих намерения или душевное состояние Трампа. Есть его длинный послужной список агрессивной риторики, как в разговоре, так и в Твиттере (до того, как платформа запретила его).Казалось, его никогда не волновало, когда его слова вызывали хаос или ущерб людям, фондовому рынку, союзникам Америки по всему миру, даже американцам, пытающимся справиться с пандемией. Он посоветовал своим слушателям наброситься на протестующих и запереть своих политических оппонентов. Он предложил пить отбеливатель или пробовать непроверенные лекарства для борьбы с вирусом короны, и некоторые люди следовали этим инструкциям. И в течение нескольких месяцев он провозглашал «большую ложь», призывая своих последователей вернуть себе результаты выборов, которые, как он утверждал, были украдены у него.Наконец, он призвал своих сторонников собраться 6 января в Вашингтоне, чтобы «остановить кражу».
Но, пообещав участникам митинга, что он будет сопровождать их в Капитолий, Трамп вместо этого вернулся в Белый дом. Там его действия, о которых было сообщено, дополнительно показали его душевное состояние. Говорят, что он был счастлив смотреть бунт в Капитолии по телевизору. Он не предпринял никаких действий, чтобы остановить своих последователей, несмотря на просьбы советников вмешаться. Он проигнорировал предупреждения об опасности и просьбы о помощи со стороны политических союзников, таких как Сен.Томми Тубервиль и лидер меньшинства Дома Кевин Маккарти, которые оказались в ловушке Капитолия. А во время беспорядков он даже призвал свою мафию преследовать тогдашнего вице-президента Майка Пенса, зная, что Пенс в опасности. Через несколько часов, когда полиция начала сдерживать беспорядки, Трамп наконец опубликовал видео с просьбой к участникам беспорядков вернуться домой. Но даже тогда он повторил свои обвинения в украденных выборах и сказал участникам беспорядков, что любит их. В последующие дни, после более чем 200 арестов, ряд участников беспорядков в защиту своих действий заявили, что они только следовали приказам Трампа.Все это является доказательством намерений.
Как признал Верховный суд в деле Watts, политическая речь грубая, шумная, воинственная в вашем лице. Пока он остается речью, он пользуется защитой Первой поправки. Но когда-то сопровождавшееся беззаконием, оно больше не защищается. И в любом случае свобода слова не защищает говорящих от последствий их выступления. Когда слова Трампа повлекли за собой немедленные беззаконные действия, когда за его словами сразу последовали буйство, незаконное проникновение, материальный ущерб, телесные повреждения и смерть, невозможно было прикрыть эти слова Первой поправкой.
Космические поляриметрические сенсоры SAR или золотой век радиолокационной поляриметрии
EPJ Web of Conferences 5 , 05004 (2010)
https://doi.org/10.1051/epjconf/20100505004
Космические поляриметрические сенсоры SAR или Золотой век
радиолокационной поляриметрии
IETR, UMR CNRS- 6164, Université de Rennes 1,
35042, г.
Ренн,
Франция
Аннотация
SAR Поляриметрия представляет собой активную область исследований в Active Earth Remote
Ощущение.Этот интерес явно подтверждается тем фактом, что в настоящее время
существует или будет существовать в ближайшем будущем немалое количество
запущены космические датчики Polarimetric SAR. Спутник ENVISAT, разработанный
от ESA, был запущен в марте 2002 года и стал первым предложением космических датчиков.
инновационная система двойного поляризации Advanced Synthetic Aperture Radar (ASAR)
работает в C-диапазоне.Второй поляриметрический космический датчик — ALOS, a
Японский спутник наблюдения Земли, разработанный JAXA и запущенный в
Январь 2006 г. Эта миссия включает в себя активный поляриметрический радиолокационный датчик L-диапазона.
(PALSAR), чьи данные с высоким разрешением могут использоваться для анализа окружающей среды и опасности
мониторинг. Третий поляриметрический космический датчик — TerraSAR-X, новый немецкий
запущен радарный спутник, разработанный DLR, EADS-Astrium и Infoterra GmbH
июнь 2007 г.Этот датчик поддерживает двойной поляриметрический и высокочастотный диапазон X
Датчик SAR, который может работать в разных режимах и предлагает функции, которые были
раньше не было доступно из космоса. По крайней мере, Поляриметрический космический датчик,
разработан CSA и MDA и назван RADARSAT-2, запущен в декабре 2007 г.
Программа Radarsat была основана на необходимости эффективного мониторинга ледяных покровов Канады.
воды, а также некоторые возможности Radarsat-2, полезные для морского и речного льда
приложения — это варианты мультиполяризации, которые улучшат кромку льда
обнаружение, распознавание типа льда и структурная информация.Многие достижения
в этих различных поляриметрических космических платформах были разработаны, чтобы реагировать
для конкретных потребностей в радиолокационных данных в приложениях для мониторинга окружающей среды вокруг
мир, например: мониторинг морского и речного льда, морское наблюдение, бедствия
управление, обнаружение разливов нефти, мониторинг снега, гидрология, картографирование, геология,
сельское хозяйство, характеристика почвы, применения в лесном хозяйстве (биомасса, аллометрия,
высота…), городское картографирование и т.д….В целях содействия эксплуатации
Поляриметрические данные из космоса, поскольку сегодня они начинают распространяться вместе с
запуск этих поляриметрических датчиков SAR, программное обеспечение PolSARpro, разработанное
по контракту с ЕКА, и это набор инструментов для научного использования
Поляриметрические данные SAR и поляриметрическо-интерферометрические данные и инструмент для высокоуровневых
образование в области радиолокационной поляриметрии было расширено и уточнено, чтобы включить все
элементы, необходимые для демонстрации ряда ключевых приложений.В
Программное обеспечение PolSARpro, которое уже поддерживало важный диапазон бортовых
и космических поляриметрических источников данных, теперь поддерживает следующие дополнительные
источники данных: ALOS-PALSAR (точный режим Dual-Pol и режим Quad-Pol), TerraSAR-X
(Режим Dual-Pol) и Radarsat-2 (режим Dual-Pol точный и Quad-Pol точный и
стандартные режимы), предлагая специальный интерфейс платформы для E.O Scientific
Следователь.Разработан ряд иллюстраций ключевых приложений.
за демонстрацию и популяризацию полярных космических полетов,
которые соответствуют деятельности, включенной в Сервисы GMES
Элемент (GSE). Цель этого сообщения — представить текущее состояние
искусство в области SAR-поляриметрии, от теории до приложений, со специальными
упор на анализ данных, предоставляемых новым полярным космическим РСА
датчики и образцы реальных поляриметрических данных будут представлены для использования в
реальные примеры ключевых приложений.
Геномная характеристика новой линии SARS-CoV-2 из Рио-де-Жанейро, Бразилия
Abstract
В этом исследовании мы сообщаем о секвенировании 180 новых вирусных геномов, полученных из различных муниципалитетов штата Рио-де-Жанейро с апреля по Декабрь 2020 года. Мы идентифицировали новую линию SARS-CoV-2, происходящую из B.1.1.28, отличающуюся пятью однонуклеотидными вариантами (SNV): C100U, C28253U, G28628U, G28975U и C29754U. SNV G23012A (E484K) в рецептор-связывающем домене белка Spike был широко распространен в образцах.Эта мутация ранее была связана с ускользанием от нейтрализующих антител против SARS-CoV-2. Это новое происхождение появилось в конце июля и было впервые обнаружено нами в конце октября и по-прежнему ограничено главным образом столицей штата. Однако, как наблюдалось для других штаммов, он может быстро распространяться в штате. Значительное увеличение частоты этой линии вызывает озабоченность в отношении управления общественным здравоохранением и постоянной потребности в геномном надзоре во время второй волны инфекций.
Строка резюме статьи Мы определили новую циркулирующую линию передачи SARS-CoV-2 в штате Рио-де-Жанейро, Бразилия, которая произошла от линии B.1.1.28.
Введение
Первые случаи заболевания, вызванного новым коронавирусом SARS-CoV-2 (COVID-19), были зарегистрированы в провинции Ухань, Китай, в декабре 2019 года. Несколько месяцев спустя, в марте 2020 года, вирус уже распространилась по всему миру в результате пандемии, которая превысила 76 миллионов случаев и 1,6 миллиона смертей (https: // coronavirus.jhu.edu/map.html) за один год.
Поскольку вакцина все еще недоступна для большинства людей, борьба с распространением вируса может быть довольно сложной задачей, особенно в странах, которые не внедрили широкое тестирование и изоляцию активных случаев. В этом сценарии подавление передачи зависит в основном от постоянного соблюдения населением нефармакологических стратегий, таких как социальное дистанцирование. В середине декабря, когда была подготовлена эта рукопись, европейские страны уже столкнулись со второй волной передачи SARS-CoV-2.В то же время Бразилия была страной с третьим по величине абсолютным числом случаев COVID-19 и вторым по летальности, с более чем 7 200 000 случаев и 186 000 смертей (https://coronavirus.jhu.edu/map.html).
Рио-де-Жанейро — третий штат Бразилии по общему количеству жителей. По данным от 14 декабря -го , хотя Рио-де-Жанейро также был вторым по абсолютному количеству случаев COVID-19, он был первым по совокупной смертности от COVID-19 в Бразилии — 138 на 100000 жителей.На столицу штата приходится самое большое совокупное число смертей в штате — 207 на 100 000 (https://susanalitico.saude.gov.br/). Активная передача, продолжающаяся с марта, и большое количество случаев представляют собой подходящий сценарий для геномного надзора. Такое исследование имеет решающее значение для определения путей распространения вируса, исходов новых линий и возможных вариаций в трансмиссивности / инфекционности или ослаблении SARS-CoV-2.
Ранее мы продемонстрировали раннее распространение SARS-CoV-2 в Бразилии (1).Здесь мы сообщаем об эволюции эпидемии в Рио-де-Жанейро с самого начала, в апреле, до незадолго до нового роста заболеваемости COVID-19 в декабре. Основываясь на анализе полных последовательностей вирусного генома, полученных от 180 пациентов из разных муниципалитетов, наши данные показывают рост частоты клонирования B.1.1.28, из которого возникла и быстро распространилась новая вариантная линия с пятью исключительными мутациями.
Методы
Сбор проб
Всего в этом поперечном исследовании приняли участие 180 участников, 82 мужчины и 98 женщин, из 19 муниципалитетов, расположенных в штате Рио-де-Жанейро, в юго-восточном регионе Бразилии.Исследование проводилось в сотрудничестве с Государственным департаментом здравоохранения Рио-де-Жанейро. Большинство пациентов — жители столицы Рио-Жанейро (60,6%). Субъекты были отобраны с апреля по ноябрь, в течение эпидемиологических недель CDC с 15 по 45, из когорт Центра диагностики COVID-19 Федерального университета Рио-де-Жанейро и Центральной лаборатории Ноэля Нутелса как в Рио-де-Жанейро, так и из Центра молекулярной диагностики. Лаборатория Дутора Франсиско Римоло Нето, Марика. Распределение по возрасту было сильно изменчивым, средний возраст составлял 39 лет (от 16 до 87) (, Приложение 1, таблица 1, ).У каждого участника были взяты мазки из носоглотки, а диагностика COVID-19 была проведена с помощью ОТ-ПЦР с использованием протокола CDC с использованием праймеров и зондов для мишеней N1 и N2. Настоящее исследование было одобрено Национальным комитетом по этике исследований и Комитетом по этике больничного университета Клементино Фрага Филью (номера протоколов: 30161620.0.1001.5257 и 34025020.0.0000.5257).
Секвенирование нового поколения и биоинформатический анализ
Синтез
кДНК и вирусная полногеномная амплификация были выполнены в соответствии с протоколом Artic Network (https: // artic.сеть / ncov-2019). Библиотеки ампликонов готовили с использованием набора TruSeq DNA Nano или набора Nextera DNA Flex (Illumina, США). Секвенирование проводили в системе MiSeq с использованием набора реагентов MiSeq Reagent Kit v3 (Illumina, США). Оценка качества данных секвенирования была выполнена с помощью FastQC (v0.11.4). Затем мы отфильтровали низкокачественные чтения (<25) с помощью trimmomatic v0.39 (2). Последовательности были сопоставлены с эталонным геномом NC_045512.2 с использованием программного обеспечения BWA 0.7.17. Затем мы сгенерировали согласованную последовательность генома с помощью bcftools v1.10.2 и пакеты bedtools v2.29.2 (3–5). Однонуклеотидные варианты (SNV) выявляли с помощью GATK v4.1.7.0 (6). Мы использовали пакет adegenet в R для выполнения кластеризации и дискриминантного анализа главных компонентов (DAPC) (7,8).
Филогенетический и филогеографический анализ
Бразильский набор данных содержит 180 новых согласованных геномов и 116 других бразильских геномов с высоким охватом, доступных в GISAID (https://www.gisaid.org/) с датами сбора в период с мая по ноябрь (данные загружены от GSAID 03 декабря 2020 г.).Мы добавили этот бразильский набор данных к глобальному набору данных, включающему 1081 геном, отобранный из GISAID, чтобы включить один геном на страну в неделю (в зависимости от дня сбора образцов) с мая по ноябрь 2020 года ( Приложение 2 ).
Для получения филогении максимального правдоподобия (ML) мы запустили IQTree 2.0.3 (9) в рамках GTR-модели нуклеотидного замещения (10) с эмпирическими частотами оснований и инвариантными сайтами. Эта конфигурация модели была выбрана с помощью инструмента ModelFinder IQ-Tree. Мы проверили наши наборы данных на рекомбинацию с использованием подхода Phi-test в SplitsTree (11,12) и не нашли доказательств рекомбинации.Мы идентифицировали три Clades, I, II и III, в дереве ML как монофилетические кластеры, которые охватывают подавляющее большинство геномов Рио-де-Жанейро с по крайней мере тремя или более последовательностями из Рио-де-Жанейро, сгруппированными в одной кладе.
Затем была оценена филогения ML для каждой из трех клад. Мы оценили временной сигнал каждого набора данных Clade с помощью TempEst 1.5.3 (13) и удалили выпадающие последовательности. Коэффициент линейной регрессии от корня до кончика генетической дивергенции относительно дат выборки 0.51, 0,71 и 0,88, для клады I, II и III, соответственно (Рисунок S1). Калиброванные по времени филогении оценивались в соответствии со строгими молекулярными часами в BEAST v.1.10.4 (14) с использованием модели нуклеотидных замен GTR + I (10) для Clades I и II и модели нуклеотидных замен HKY (15) для Clade III. . Мы приняли априорное дерево экспоненциального роста и указали нормальное априорное значение для тактовой частоты со средним значением = 8 × 10-4 и stdev = 0,1 × 10-5. Мы также использовали дискретную диффузионную модель (16), чтобы сделать вывод о состоянии каждого внутреннего узла филогении, рассматривая местоположение как дискретную черту только с тремя возможными состояниями: «RJ», «Бразилия» и «Другие».Сходимость цепочек MCMC, которые выполнялись не менее 20 миллионов поколений и отбирались на каждом 1000-м шаге, проверялась с помощью Tracer v.1.7.1 (17). Сводные деревья максимального доверия к кладам (MCC) были сгенерированы с использованием TreeAnnotator v.1.10.4 (14).
Мы использовали расслабленную диффузионную модель случайного блуждания (18), доступную в BEAST 1.10 (14) с распределением Коши, для оценки деревьев, внутренние узлы которых связаны с географическими координатами. Мы провели независимый анализ для каждого ранее идентифицированного кладбища Рио-де-Жанейро, исключая все геномы, географические координаты которых не были известны.Мы отнесли широту и долготу каждого генома к точке, выбранной случайным образом в районе проживания пациента (приложение 1, таблица 1). Цепочки MCMC запускались для 10 миллионов поколений и регистрировались каждые 1000 шагов, сходимость оценивалась с помощью Tracer v1.7.1 (17). Мы использовали пакет spread3 (19) для извлечения и отображения пространственно-временной информации, встроенной в апостериорные деревья.
Результаты
В среднем сборка вирусного генома достигла 99% охваченных сайтов со средней глубиной более 3500x ( Приложение 1, таблица 2, ).Мы обнаружили в общей сложности 731 однонуклеотидный вариант (SNV) в 180 образцах, из которых 50,3% были бессмысленными, 44,5% синонимичными, 5,1% межгенными и 0,1% бессмысленными ( Приложение 1, таблица 3 ). Большинство вариантов было идентифицировано исключительно в одном образце с частотой аллелей ниже 1%. SNV с частотами аллелей более 60% соответствовали мутационным сигнатурам вирусных линий, происходящих из B.1.1 ( Рисунок 1A ). Мы также нашли десять вариантов с промежуточными частотами между 20-35%, из которых пять встречались вместе во многих выборках.
Рисунок 1. Генетическая характеристика и анализ популяционной структуры геномов SARS-CoV-2 в Рио-де-Жанейро.
A) Распределение однонуклеотидных вариантов по вирусному геному. Каждая вертикальная линия представляет частоту вариантов в 180 образцах, нацеленных на белковые продукты вируса. Области, выделенные зеленым, представляют пять основных килобаз с наибольшим количеством мутаций. Красным цветом мы показали плотность мутаций по всему геному. Б) K-средние и дискриминантный анализ главных компонентов (DAPC), показывающий четыре кластера, обнаруженных нашим анализом.Каждый кластер характеризовался как минимум одним дискриминантным SNV. B1.1.28 и кластер 1 имеют один общий вариант, тогда как B.1.1.33 и кластер 2 имеют два общих SNV. Мы также показали временное распределение выборок из каждой группы.
Генетический скрининг на килобазу выявил наивысшее соотношение мутаций на 3 ’конце генома, в основном нацеленных на белки ORF3a и N ( Рисунок 1A ; Приложение 1 Таблица 4 ). Эти области были также идентифицированы с помощью скрининга по белкам в дополнение к ORF9c и другим белкам (, приложение 1, таблица 5, ).Большое количество мутаций, обнаруженных в ORF3a, было связано с накоплением несинонимичных вариаций по всему геному ( Рисунок S2 ). Этот паттерн был обнаружен исключительно в белках ORF3a и S, тогда как сбалансированное приобретение новых синонимичных и несинонимичных SNV наблюдалось в N и ORF9c ( Рисунок S2 ). Аналогичные результаты были получены для других структурных и неструктурных белков генома SARS-CoV-2 (, рисунок S2 ).
B.1.1.33 (58%) и B.1.1.28 (32%) представляли подавляющее большинство вирусных линий, распространенных в Рио-де-Жанейро ( Приложение 1, Таблица 1 ). Тем не менее, совместное появление SNV промежуточной частоты может указывать на появление новых вариантных клонов во время эпидемии. Затем мы применили алгоритм K-средних в сочетании с дискриминантным анализом основных компонентов (DAPC), чтобы установить динамику структуры населения в ходе эпидемии в Рио-де-Жанейро. Сохраняя первые 100 основных компонентов, мы достигли примерно 90% генетической изменчивости в наших выборках ( Рисунок S3A ).Значения байесовского информационного критерия (BIC) показали оптимальную кластеризацию четырех различных групп: родословных B.1.1.28 и B.1.1.33 и двух дополнительных кластеров, названных Cluster 1 и Cluster 2 ( Рисунок 1B; Рисунок S3B ). Тридцать два из 180 образцов были отнесены к кластеру B.1.1.28, характеризующемуся миссенс-вариантом G25088U (V1176F) в S-белке, также общим для всех образцов из кластера 1 (, рис. 1C, ). Наибольшее количество проб (n = 103) наблюдалось в кластере B.1.1.33, представленный двумя миссенс-вариантами U27299C (I33T) и U29148C (I292T) в белках ORF6 и N соответственно.
Кластер 1 состоял из 38 образцов, преимущественно из линии B.1.1.28, обнаруженных после начала октября ( Рисунок 1D ). Этот кластер характеризовался совместным возникновением пяти исключительных вариантов. Два варианта картировали 5 ’и 3’ конец (C100U и C29754U) соответственно, синонимичный C28253U (F120F) в ORF8 и два миссенс G28628U (A119S) и G28975U (M234I) в N-белке.В дополнение к этим пяти вариантам мы также обнаружили замену G23012A (E484K) в S-белке в 36 из 38 образцов в этой группе. В кластере 2 был обнаружен один эксклюзивный миссенс-вариант C28087U (A65V) в ORF8 во всех семи образцах. Мы также наблюдали три SNV G21641U (A27S), C22088U (L176F) и C26735U (Y71Y), нацеленные на S и M в четырех из семи выборок из этого кластера. Образцы из линии B.1.1.28 и кластера 1 преимущественно были обнаружены в образцах, собранных недалеко от столицы штата, тогда как B.1.1.33 и Кластер 2 также были обнаружены в других регионах штата ( Приложение 1 Таблица 1 ).
Затем мы проверили монофилетический статус кластеров 1 и 2, чтобы определить, являются ли они возможными развивающимися линиями. Филогенетическая реконструкция всемирного набора данных с более чем тысячей вирусов подтвердила, что 38 геномов из кластера 1 сформировали хорошо поддерживаемую монофилетическую кладу, расположенную внутри более крупной клады, состоящей из штаммов B.1.1.28 (, рис. 2, ). Монофилетическое состояние не наблюдалось для семи образцов кластера 2, хотя все они находятся в кладе B.1.1.33.
Рис. 2: Дерево максимального правдоподобия 1376 геномов SARS-CoV-2, включая 180 новых бразильских геномов, созданных в этой работе.
Мы случайным образом взяли 1 геном в неделю / страну из всех доступных образцов в GISAID с датами сбора в период с мая по ноябрь. Все бразильские последовательности с датами сбора с мая по ноябрь были добавлены в набор данных. Наконечники окрашены в соответствии с их происхождением. Геномы, созданные в результате этой работы, окрашены в красный цвет, другие бразильские геномы — в синий цвет, а геномы из других стран не окрашены.Серые прямоугольники представляют три клады, в которых сконцентрированы бразильские вирусы. Эмерджентная линия, выявленная в этой работе, выделена красными ветвями.
Мы также заметили, что подавляющее большинство (86,8%) бразильских геномов, собранных в период с мая по ноябрь 2020 года (257 из 296), попадают в три клады, названные ниже Clade I, Clade II и Clade III (Рисунок 2). Clade I состоит из штаммов B.1.1.33, а Clade II и III состоит из вирусов B.1.1.28. Другие линии, такие как Б.1 и B.1.1, также были отобраны, но они внесли незначительный вклад в установление эпидемии в Бразилии. Ни одна из этих трех линий не появляется внутри штаммов, составляющих какую-либо из трех клад. Clade I охватывает 55% бразильских геномов (165 из 296), за ним следует Clade II с 26% и Clade III с 4%. Штаммы Рио-де-Жанейро также были почти ограничены этими кладами (200 из 220; 90,9%), при этом 63,2% штаммов Рио-де-Жанейро входили в группу I; 24,1% в Clade II; и 3,6% в Clade III.Дальнейшие анализы проводились только с этими тремя кладами, поскольку они содержат подавляющее большинство образцов из Рио-де-Жанейро.
Появление Кластера 1 датируется началом июля 2020 года (Рисунок 3). Интересно, что самая последняя выборка из новой вариантной линии датируется концом октября, почти через четыре месяца после предполагаемого появления. Четкую картину кластеризации можно наблюдать у вирусов Рио-де-Жанейро, поскольку они, по-видимому, больше связаны друг с другом, чем с разными местностями.Даже при полном анализе набора данных можно наблюдать клады исключительно из Рио-де-Жанейро (рис. 2). Мы определили расположение предковых узлов с помощью нашего дискретного филогеографического анализа, и, как и ожидалось, состояние, предполагаемое для большинства внутренних узлов в трех кладовых, — Рио-де-Жанейро (рис. 3). Большинство наших образцов находится в кладах, чье наследственное местонахождение находится в Рио-де-Жанейро, а клады с родовым государством Рио-де-Жанейро почти полностью состоят из вирусов из этого места.
Рис. 3. Деревья дерева бразильских кладов SARS-CoV-2 в масштабе времени.
Кружки в вершинных узлах окрашены в соответствии с их местоположением. Образцы из Рио-де-Жанейро показаны зелеными кругами, розовый представляет кластер 2, а фиолетовый — новую линию происхождения, идентифицированную в этой работе, которая также выделена серым прямоугольником. Замены, которые характеризуют зарождающееся происхождение, показаны синим цветом над ветвью, определяющей родословную. Серые столбцы представляют интервал 95% hpd для предполагаемого возраста. Клады Рио-де-Жанейро, идентифицированные с помощью дискретного филогеографического анализа, показаны синим цветом.
Мы выполнили непрерывную филогеографическую реконструкцию, чтобы смоделировать распространение вируса по штату (, рис. 4, ). По нашим оценкам, город Рио-де-Жанейро представляет собой основной источник штаммов вирусов, циркулирующих в штате. Наши реконструкции также показывают наличие нескольких случаев расселения на большие расстояния из столицы в более отдаленные районы штата. Мы пришли к выводу, что родословные к столице штата немногочисленны, все из города Марика.
Рисунок 4: Филогеографические выводы о распространении SARS-CoV-2 в штате Рио-де-Жанейро.
Пространственно-явная реконструкция кластеров SARS-CoV-2 в Рио-де-Жанейро, идентифицированных с помощью дискретного филогеографического анализа в каждом из кладов дерева. Каждая точка представляет собой узел дерева MCC и окрашена в соответствии с предполагаемым временем появления. Изогнутые линии представляют ветви филогении и направленность движения, как показано в легенде рисунка.
Обсуждение
В этом исследовании мы идентифицировали новый циркулирующий штамм SARS-CoV-2, происходящий от B.1.1.28 и широко распространены в штате Рио-де-Жанейро. По нашим оценкам, новая линия появилась в начале июля, примерно за четыре месяца до обнаружения первых геномов этой линии. Мы продемонстрировали, что эпидемия COVID-19 в Рио-де-Жанейро характеризовалась тремя основными кладами, две из которых представляли подавляющее большинство циркулирующих вирусов, классифицированных как линии B.1.1.28 и B.1.1.33. Интересно, что это разделение на три клады также наблюдалось в Бразилии во время начала пандемии SARS-CoV-2 (1).
Согласно нашим результатам, последовательности Рио-де-Жанейро также в основном ограничивались этими тремя кладами и чаще были связаны друг с другом, чем со штаммами из других штатов или за пределами страны. Этот образец предполагает ограниченный вклад чужеродных вирусов в состав родословных Рио-де-Жанейро. Однако эти результаты могут быть искажены из-за нехватки бразильских образцов. Требует дальнейшего изучения, является ли эта модель агрегации геномов Рио-де-Жанейро с небольшим количеством предполагаемых событий интродукции высокой коммунитарной передачей или следствием низкой выборки.Несмотря на низкий коэффициент выборки, наши данные показывают, что цепи передачи, циркулирующие в Рио-де-Жанейро, были установлены в результате ограниченного числа инфекционных случаев, что не наблюдалось в других отчетах, где присутствует важный вклад внешних интродукций и нет преобладающего линия была идентифицирована (20,21).
Мы заметили изменение относительной доли геномов, взятых из каждой линии в Бразилии, с течением времени. Анализируя наши данные вместе с геномами, доступными в GISAID, мы обнаружили, что B.1.1.28 пробы становятся все более частыми в стране (Рисунок 5). Кроме того, увеличение относительной частоты B.1.1.28 синхронно с возрастом, предполагаемым для предковой линии передачи нового варианта. Возникновение этой линии, вероятно, может быть связано с увеличением числа случаев COVID-19 (так называемая вторая волна) в штате. Вместе с уже существующими вирусными линиями, циркулирующими в Рио-де-Жанейро, вторая волна инфекции может характеризоваться наличием этой новой линии.
Рис. 5: Эволюция относительной частоты линий передачи SARS-CoV-2 в Бразилии.
Бразильский набор данных, состоящий из 180 геномов, созданных в этой работе, а также всех бразильских геномов с датами сбора с мая по ноябрь, доступными в GISAID, был представлен для классификации панголинов. Относительная частота каждой линии в каждом месяце была нанесена на график. Цвета представляют каждую родословную, как описано в легенде рисунка.
Многие мутации часто возникают в геноме SARS-CoV-2 во время цикла репликации вируса и механизмов защиты внутри хозяина (22).Однако большинство этих вариантов теряются в результате процесса естественного отбора, что также приводит к фиксации некоторых вариантов в популяции. Совпадение фиксированных мутаций в популяции будет характеризовать новую вирусную линию.
Действительно, новые линии передачи SARS-CoV-2 возникают в нескольких регионах по всему миру (23). Недавно филогенетический анализ выявил новую возникающую линию SARS-CoV-2 в Соединенном Королевстве, в основном отличающуюся вариантом A23063T (N501Y), нацеленным на рецептор-связывающий домен (RBD) в белке Spike.Интересно, что помимо пяти SNV, которые характеризовали нашу новую линию, мы также идентифицировали мутацию G23012A (E484K) в области RBD белка Spike. Это изменение ранее было связано с уходом от нейтрализующих антител против SARS-CoV-2 (24,25). Тем не менее, необходимы дальнейшие анализы, чтобы предсказать, оказывают ли изменения в этих новых клонах важное влияние на вирусную инфекционность, иммунный ответ хозяина или тяжесть заболевания. Также необходим экспериментальный анализ, чтобы понять молекулярные и физиологические последствия этих изменений.
Усилия по постоянному мониторингу эволюции вируса в ходе пандемии имеют решающее значение для оценки динамики инфекции и структуры населения. Тем не менее, геномный надзор по-прежнему является проблемой в Бразилии, учитывая небольшое количество последовательностей, созданных за этот период. Наше исследование показало значительное увеличение числа геномов, доступных в общедоступных базах данных из Рио-де-Жанейро и, следовательно, из Бразилии (добавление 180 новых почти полных геномов к 314 уже имеющимся в GISAID).Наконец, по состоянию на 18 декабря 2020 года, когда мы писали эту работу, четыре последовательности, содержащие одни и те же пять эксклюзивных вариантов линии нового варианта, уже были обнаружены в Соединенном Королевстве и Соединенных Штатах (номера доступа GISAID EPI_ISL_668335, EPI_ISL_677211, EPI_ISL_677212, EPI_ISL_683969) . Все даты сбора были более поздними, чем наши (от 12.11.2020 до 14.11.2020). В конечном итоге это может указывать на распространение этой бразильской линии по всему миру.
Доступность данных
Данные NGS, полученные в нашем исследовании, находятся в открытом доступе в SRA-NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/sra), регистрационный номер Биопроекта PRJNA686081. Последовательности генома также хранятся в Gisaid (www.gisaid.org), а идентификаторы доступа перечислены в Приложении 1, таблица 6.
Члены рабочей группы
Covid19-UFRJ Workgroup
Александр Отавио Кьеппе, Марио Серхио Рибейро, Сильвия Кристина де Карвалью Кардозу, Жоао де Фариас Фигейреду, Леандро Магальяйнш де Соуза, Вероника Гуэдес де Ногейра, Фредерико Франсиско Насименто, Хосе Паулу Мотта Филью, Изабела де Карвалью Лейтао, Анна Карла Пинто Кастиньейрас, Ромина Карвалью де Сильо-де-Сильо-де-Бьяньо-де-Бьяньо-де-Сильоса Оливейра, Гильерме Сант’Анна де Лира, Хелена Толедо Шейд, Лаура Залькберг Рено, Летисия Авербуг Корреа, Марсела дос Сантос Дурайнш, Ракель Фернандес Коэльо, Виктор Акира Ота, Виктория Кортес Бастос, Роберто Медроньо, Лукас Дальсентер де Карло да Силзентер Романо Сенна Коста, Селсу Пансера, Клаудиа дос Сантос Родригес, Андрея Рибейру Коста, Уилсон Родригес де Соуза Жуниор, Марсело Коста Велью Мендес де Азеведо, Лучиана Хесус К. Оста, Алиса Лащук Херлингер, Кассия Кристина Алвес Гонсалвес, Синтия Поликарпо, Эрика Рамос душ Сантуш Насименто, Фернанда Лейтау душ Сантуш, Филипе Ромеро Ребелло Морейра, Франсин Биттенкур Шиффлер, Джессика Масиелло Сулдосато де Алмейороида, Джулиана Теаиэ де Паула Торрес, Мирела Д’Арк Феррейра да Коста, Педро Энрике Коста да Пас, Тайс Феликс Кордейро да Крус, Рикардо Хосе Барбоза Сальвиано.
LNCC-Workgroup
Лучиан Приоли Чиапина, Рангель Селсу Соуза, Эллен дос Сантос Корреа, Бруно Зоновелли да Силва, Гильерме Корденонси да Фонсека, Винисиус Прата Клох, Эдуарескан де Фариа Вагнера
Заявление об ограничении ответственности
Авторы сообщили о любых конфликтах интересов, связанных с этой статьей.
Автор Биография
Каролина М. Волоч — доцент кафедры генетики Федерального университета Рио-де-Жанейро.Исследования сосредоточены на использовании инструментов биоинформатики для изучения молекулярной эволюции, филогенетики и геномики вирусов.
Роналду да Силва Франсиско Жуниор — член Лаборатории биоинформатики (LABINFO / LNCC) и кандидат наук в области генетики Федерального университета Рио-де-Жанейро. Самые последние достижения в области биоинформатики, анализа генетических вариантов и клинической геномики с упором на вызов вариантов, секвенирование всего экзома и RNA-Seq.
Рисунок
Рисунок S1.Сплошная регрессия генетической дивергенции относительно дат сбора образцов для наборов данных Clade I, II и III.
Коэффициенты линейной регрессии также показаны для каждого случая.
Рисунок S2. Приобретение синонимичных и несинонимичных вариантов в каждом белковом продукте генома SARS-CoV-2 с течением времени.
Ежемесячное приобретение различных вариантов каждого белка вируса с течением времени. Ось абсцисс представляет интервал месяцев с апреля по ноябрь, а ось ординат — количество идентифицированных новых вариантов, нормализованное по количеству образцов, секвенированных в каждом месяце.
Рисунок S3. Выводы о генетической изменчивости и структуре популяции.
A) Анализ главных компонентов (PCA) генетического разнообразия, обнаруженного в 180 образцах. Б) Байесовский информационный критерий (BIC) для каждого возможного количества кластеров.
Таблицы
Приложение 1 Таблица 1 : Эпидемиология и информация об образцах.
Приложение 1 Таблица 2 : Контроль качества и показатели последовательности.
Приложение 1 Таблица 3 : Геномные варианты, идентифицированные в геноме SARS-CoV-2 в 180 секвенированных образцах.
Приложение 1 Таблица 4 : Анализ соотношения мутаций на килобазу.
Приложение 1 Таблица 5 : Анализ соотношения мутаций белков.
Приложение 1 Таблица 6 : Идентификаторы для доступа к данным в NCBI / SRA и GISAID
Приложение 2: Таблица подтверждений GISAID
Благодарности
Эта работа была разработана в рамках Corona-ômica-RJ (FAPER-RJ (FAPER-RJ) E-26 / 210.
Добавить комментарий